[发明专利]一种走马胎的离体培养快速繁殖方法

说明书

一种走马胎的离体培养快速繁殖方法，步骤如下：在原MS培养基中添加FeSO₄·7H₂O、添加抗坏血酸、添加蔗糖、添加琼脂，制备得到改良MS培养基，将消毒外植体置于诱导培养基中进行诱导培养，诱导培养基的配方：以改良MS培养基为基础，添加IBA、6‑BA和KT；将走马胎不定芽接种于丛芽增殖培养基中，以改良MS培养基为基础，添加IBA、6‑BA L和KT；生根培养基的配方：以改良MS培养基为基础，将其中的大量元素的剂量调整为原来的一半，再添加NAA和IBA；最后走马胎再生植株进行炼苗、移栽。组织培养快繁技术能提供大量优质的走马胎种苗，满足市场需求，保护野生资源不受破坏，促进其在中医药产业中更好的应用。

技术领域

本发明涉及植物组培快繁技术，具体是一种走马胎的离体培养快速繁殖方法。

背景技术

走马胎(Ardisia gigantifolia)又名大叶紫金牛，是紫金牛科(Myrsinaceae)紫金牛属(Ardisia) 多年生小灌木植物，其干燥根及根茎是我国传统中药材，药用历史悠久，具有很高的药用价值。走马胎的味辛，性温，具有祛风湿、壮筋骨、活血祛痕等功效，广泛应用于跌打损伤、风湿骨痛、产后血痕、痈疽溃疡等症，抗类风湿性关节炎，且疗效显著。走马胎主要药用化学成分包括三菇皂葺类、岩白菜素类、酚类、苯醒类、挥发油类等，其中三菇皂葺类和岩白菜素类这两类化合物在抗肿瘤、抗氧化、抗血栓等方面具有重要意义是目前研究的热点。目前，走马胎也不局限于作为临床药用，而且在开发食疗和保健方面的的应用也不断扩展。走马胎对光线的响应，确定合适的种植条件，以及种群的分布具有研究，为开展人工种植打下了基础。利用走马胎幼嫩叶片为外植体，诱导叶片愈伤组织、进行不定芽分化、增殖及生根培养已成功，利用用茎段繁殖，并开展工厂化生产走马胎种苗还未见报道。通过组织培养技术保障了种质的纯度和一致性，并能够在短期内通过标准化生产，实现走马胎种苗生产的规模化，为生产上提供充足的种苗，缓解当前的种植困境。本发明对走马胎的茎段快速繁殖的因素进行了探索，为走马胎组培苗的工厂化生产提供技术体系，满足当前市场需求。

走马胎繁殖系数较低，通过建立走马胎种苗的快速繁殖技术，可有效缩短育苗时间，保障种苗的质量，也为工厂化生产走马胎种苗提供技术支撑。人中种苗的繁育有助于走马胎的规模化、标准化种植，缓解当前原料紧张的困境。同时，也为保护野生走马胎的种子资源提供保障，有助于走马胎资源的稳定。能持续提供大量的走马胎种苗，在生产上有种重要的意义。目前植物组织培养快速繁殖在技术上非常成熟，对于种苗的生产，后代稳定保持母的优良性状是进行工厂化生产的前提，器官发生途径的变异要较愈伤组织途径低，因而在生产上大多采用茎段繁殖。在生产中获得无菌外植体和高增殖效率是能否开展组培快繁的主要因素，直接生产成本。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种走马胎的离体培养快速繁殖方法。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种走马胎的离体培养快速繁殖方法，步骤如下：

(1)改良MS培养基的制备

改良MS培养基的配方：在原MS培养基中添加FeSO₄·7H₂O、添加抗坏血酸、添加蔗糖、添加琼脂，其他组分均无变化；在改良MS培养基中FeSO₄·7H₂O的浓度为50～60mg/L，抗坏血酸的浓度为5～10mg/L，蔗糖的浓度为25～35g/L^-1，琼脂的浓度为5.0～6.0g/L^-1；

(2)外植体消毒和不定芽诱导：