[发明专利]一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法以及对该类固醇激素的检测方法

说明书

本发明公开了一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法。该方法包括固相萃取柱活化；样本处理后加入固相萃取柱；对固相萃取柱淋洗、洗脱，收集洗脱液；加入有机溶剂涡旋混匀，室温离心处理后，转移到96孔板中，封膜待测。采用固相萃取不但可以去除杂质干扰，还可以大幅提高检测灵敏度，满足唾液中痕量类固醇激素的检测要求。与其他前处理方法相比，本法操作简单，节省溶剂，对环境影响小；分析时间短，通量高，7min内即可完成检测。本法使用同位素内标法定量类固醇激素，检测误差小，且通过全面的方法学验证，可用于唾液样本中氢化皮质酮，睾甾酮和脱氢异雄酮的检测和相关疾病的筛查。本发明还公开了一种对唾液固相萃取后的多种类固醇激素的检测方法。

技术领域

本发明涉及类固醇激素固相萃取和仪器分析质谱检测领域，特别是涉及一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法以及对该类固醇激素的检测方法。

背景技术

随着社会经济迅猛发展，人们生活节奏随之加快，压力增大，影响体内氢化皮质酮，睾甾酮，脱氢异雄酮等类固醇激素的分泌，可出现焦虑、沮丧、恐惧、性障碍、不孕、经前症候群、睡眠不稳、心血管疾病等多种病症。血清、尿液和唾液是检测人体激素的常用样本，由于抽血本身是一种急性应激源，可能造成相关类固醇激素升高，且大部分类固醇激素与血清蛋白相结合而无生物活性，因此测定血液中的激素有许多的局限和不足；尿液中类固醇激素可以间接反应血清中类固醇激素的水平，但需收集24小时尿液，过程繁琐复杂；因此采用唾液作为压力相关类固醇激素测定的标本，能够避免抽血应激，真实反映体内具有生物活性的游离类固醇激素水平和分泌节律变化。

目前针对唾液样本中的类固醇激素的检测，除了传统的酶联免疫法，有些通过乙酸乙酯，或与正己烷一起进行液液萃取提取类固醇激素；另外还有使用纳米羟基磷灰石改性氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜对唾液进行过滤处理。

已有前处理技术和检测方法存在许多不足：

1、液液萃取法除了提取类固醇激素外，还会把其它与提取溶剂极性相似的物质提取出来，造成杂质多，检测干扰大；

2、纳米羟基磷灰石改性氧化石墨烯/聚偏氯乙烯复合微滤膜制备需要经过数十小时处理，步骤繁琐，耗时较多；

3、酶联免疫法抗干扰能力差，易发生交叉反应，灵敏度也较低。

因此，市面上亟需一种能够解决上述一个或者多个问题的唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法以及对该类固醇激素的检测方法。

发明内容

为解决现有技术中存在的一个或者多个问题，本发明提供了一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法以及对该类固醇激素的检测方法。

本发明为达到上述目的所采用的技术方案是：一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，所述方法包括：

步骤01、选取至少两个固相萃取柱，对其进行活化处理；

步骤02、取唾液样本和类固醇激素混合标曲工作液，分别往唾液样本和类固醇激素混合标曲工作液内加入稀释剂和内标工作液；混匀后分别加入到经步骤01活化后的固相萃取柱中；

步骤03、分别往经过步骤02处理后的固相萃取柱内加入淋洗液，使其流干；

步骤04、分别往经过步骤03处理后的固相萃取柱内加入洗脱液，并用EP 管收集洗脱液，氮气吹干；

步骤05、往步骤04收取的装有洗脱液的EP管内加入甲醇溶液，涡旋混匀，室温离心处理后，转移到96孔板中，封膜待测；

所述内标工作液为氘代类固醇激素。

在一些实施例中，所述固相萃取柱的吸附剂为键合N-乙烯基吡咯烷酮的聚苯乙烯基质。

在一些实施例中，所述类固醇激素混合标曲工作液为氢化皮质酮储备液、睾甾酮储备液、脱氢异雄酮储备液和甲醇的混合溶液。