[发明专利]一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法及其制备方法

权利要求书

1.一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的主要成分和组成浓度包括：

所述试剂R2的主要成分包括：试剂R2的第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物，其中，保存液包括N,N-二羟乙基甘氨酸、稳定剂和第二防腐剂；胶乳微球抗体偶联物包括胶乳微球、生物素、链霉亲和素、α1-酸性糖蛋白单克隆抗体和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；主要成分浓度为：

2.根据权利要求1所述的一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法，其特征在于：所述试剂R1的第一缓冲液A和第二缓冲液B为PBS缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法，其特征在于：所述试剂R1的促进剂为PEG 6000。

4.根据权利要求1所述的一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法，其特征在于：

所述试剂R1的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法，其特征在于：所述试剂R2中的第二缓冲液为MES缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法，其特征在于：所述试剂R2中的稳定剂为牛血清白蛋白。

7.根据权利要求1所述的一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法，其特征在于：所述试剂R2中第二防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300中的一种。

8.根据权利要求1所述的一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法，其特征在于：所述生物素结合α1-酸性糖蛋白单克隆抗体比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-α1-酸性糖蛋白单克隆抗体比例为0.5:1-4:1之间。

9.一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒胶乳免疫比浊法的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：A)、试剂R1制备：

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第一缓冲液A和第二缓冲液A，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入促进剂和第一防腐剂，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值在6.80-8.00之间，并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

B)、试剂R2制备：

步骤B1：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第二缓冲液，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到4.50-6.50之间，并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

步骤B2：保存液配制

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入第二防腐剂，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值到6.30-8.50之间，并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；

步骤B3：胶乳微球抗体偶联物的制备

将胶乳微球用反应液稀释到0.3-3.0％的浓度，与链霉亲和素按一定比例结合，将α1-酸性糖蛋白单克隆抗体以反应液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,与生物素按一定比例结合透析过夜后，加入到含有链霉亲和素的微球中，混匀，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以反应液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入稳定剂封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。