[发明专利]一种去膜端黄卵的整胚固定方法

权利要求书

1.一种去膜端黄卵的整胚固定方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

1) 三氯乙酸固定：将端黄卵置于三氯乙酸水溶液中进行室温固定；所述的三氯乙酸水溶液的浓度为4-6%；室温固定0.5-2小时，固定时间长短与三氯乙酸的使用浓度有关，使用的浓度越高，则缩短固定时间；

2) 多聚甲醛固定：去掉三氯乙酸水溶液，将端黄卵再用多聚甲醛溶液进行固定；所述的多聚甲醛溶液的浓度为4%；

3) 置换固定液：用磷酸缓冲溶液PBS置换部分多聚甲醛固定液，4℃保存待用；

4) 去膜：将3）中固定后的受精卵的受精膜去掉，得到完整的胚胎，用磷酸缓冲液或甲醇保存。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的3）中所述的磷酸缓冲溶液PBS的组分如下：128 mM NaCl, 2 mM KCl, 8 mM NaH₂PO4, 2 mM KH₂PO4, pH 7.2。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

1) 三氯乙酸固定：

将端黄卵吸入离心管中，去掉溶液后加入4-6%的三氯乙酸溶液，室温固定0.5-2小时；

2) 多聚甲醛固定：去除三氯乙酸溶液，在端黄卵中加入4%多聚甲醛溶液，4℃固定过夜或室温固定2-3小时；

3) 置换固定液：多聚甲醛固定完后，用磷酸缓冲溶液PBS置换体积的多聚甲醛溶液，并于4℃保存待用；

4) 去膜：将步骤3）处理后的受精卵的受精膜去掉，得到固定的完整的胚胎。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的1）中是使用6%浓度的三氯乙酸固定0.5小时，或4%浓度的三氯乙酸固定1小时。