[发明专利]miRNA-155作为足细胞损伤肾脏诊断标志物的应用

说明书

本发明公开了miRNA‑155作为肾小球病足细胞损伤的早期诊断标志物中的应用，具体包括在制备肾小球病足细胞损伤诊断试剂或试剂盒或基因探针中的应用，以及在在测试、制备治疗肾小球病足细胞损伤的药物中的应用。本发明在临床上试验证明个体血液及尿液中的miRNA‑155的变化对于肾小球病足细胞损伤的诊断具有较高的灵敏度和特异性。miRNA‑155的表达变化还可用于判断足细胞的损伤程度，本发明将为肾小球病足细胞损伤提供新的诊断方法，为肾小球病足细胞损伤提供新的靶向物，为足细胞损伤肾病药物的开发和制备提供了新的靶向物。

技术领域

本发明设计生物技术领域，具体涉及一种TGF-β1诱导的足细胞损伤肾脏的诊断生物标记物miRNA-155及应用。

背景技术

目前为止，肾小球疾病足细胞损伤的分子机制尚未还全明确，诊断水平仍需进一步提高，还需要更多、更优秀的早期诊断标志物。当前诊断肾小球疾病的的金标准仍然是肾活检，但这种有创的检查方法，无法在临床上反复进行，无法应用于临床长期监测。其他替代标志物，比如尿脱落细胞，尿蛋白分泌物，血清肌酸酐浓度，肌酸酐清除率等，在较严重的肾病出现时经常会出现异常检测结果。因此，寻找非入侵的，易获得的，能精准鉴定早期肾小球疾病的生物标志物具有重要的临床意义。对于足细胞损伤，裂孔膜蛋白(如nephrin,podocin,CD 2AP等)和骨架蛋白(如α-actinin-4,F-actin,synaptopodin,vimentin,nestin,podocalyxin等)是主要的生物标志物，但这些标志物基本都属于下游因子，无法实现早期诊断。综上所述，当前仍需要开发更多、更优秀的足细胞损伤早期标志物。

MiR-155作为肾小球疾病足细胞损伤标志物具有一些自身优势，主要体现在：①MiR-155具备miRNA所共同具备的特点，即在组织和体液中稳定存在，且不受内源RNA酶影响，是非常理想的候选生物标志物；②MiR-155可在尿液中被检测，其优势在于：A.尿液相比血液更容易获取；B.尿液中的标志物是最能够反应当前肾脏状态的因子；C.尿液的成分相对简单，干扰因素也比血液少，更容易获得准确的检测数据。因此，miR-155相比血液标志物更适合作为肾小球疾病足细胞损伤的早期标志物；③miR-155处在miR-155→整合素通路→骨架蛋白通路→足细胞损伤整条通路的上游，适合作为早期诊断标志物。

肾脏疾病多数影响的是肾脏局部,而尿液沉渣中基因表达分析则反应了整个泌尿生殖道的生物学信息。尿液沉渣中细胞来源较为复杂,包括红细胞、白细胞肾小管上皮细胞、鳞状细胞及泌尿道上皮细胞,病理条件下还可能出现其他细胞种类。因此,基因表达分析中mRNA的细胞来源较难区分，同时源自膀胱或女性生殖道的炎症细胞的污染仍然是一主要问题。该技术的另--缺陷主要在于从尿液,标本中获取的RNA总量有限,因此就限制了多种基因表达分析的规模,从而使其用于肾脏疾病筛查的难度加大。因此，未来的研究应更注重针对特定疾病特定目标基因组的表达分析。

尿液mRNA分析是一项相对简单易行的新型无创性分析技术快速发展的mRNA芯片检测技术亦越来越多的应用于各项研究中,其在高通量、快速、平行检测大样本中发挥了巨大的优势。因此寻找反映疾病进展或活动的分子标志物,将具有十分重要的临床意义。

发明内容

本发明提供了miRNA-155作为肾小球病足细胞损伤的早期诊断标志物中的应用以及miRNA-155在制备肾小球病足细胞损伤诊断试剂或试剂盒或基因探针中的应用。

所述诊断试剂检测样本中miRNA-155和/或其前体的表达情况。采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中miRNA和/或其前体的转录。

所述样本为尿液。

本发明采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中miRNA和/或其前体的转录。