[发明专利]一种新的肿瘤标记方法

权利要求书

1.一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，通过放射性碘131标记血管内皮生长因子VEGF实现，¹³¹I标记VEGF抗体通过氯胺-T法进行。具体包括以下步骤：

1)用PB液配置氯胺T溶液和Na₂S₂O₅溶液。取一定量VEGF抗体于EP管，置于4℃冰箱中；依次向EP管中加入一定量Na¹³¹I溶液、PB液和氯胺T溶液；立即在电磁搅拌器下搅拌一段时间；迅速加入100μl Na₂S₂O₅溶液终止反应。

2)向Sephadex G50柱中加入一定量PB液平衡柱子，待平衡液全部流入柱中后，加入反应液；待反应液全部流入柱床后，用PB液洗脱，流出液收集于EP管中，收集液逐管在放射性核素活度计内测量。继续用PB液洗脱，直至淋洗流出液在活度计内测量活度接近本底再倒入废液瓶。

3)取一定量反应管内的标记液和¹³¹I-VEGF抗体峰产品，采用新华1号层析纸作固定相在生理盐水中展开，在层析纸的原点处用毛细管点样，进行标记率和放化纯的测定。第一峰为¹³¹I-VEGF抗体产品峰，第二峰为游离的¹³¹I峰。反应管中的标记液用作标记率的测定，标记率＝层析纸中¹³¹I-VEGF抗体产品峰的放射性计数率/(¹³¹I-VEGF抗体产品峰的放射性计数率+游离¹³¹I峰的放射性计数率)×100％。分离纯化的¹³¹I-VEGF抗体产品峰洗脱液用作放化纯的测定，放化纯＝层析纸中¹³¹I-VEGF抗体产品峰的放射性计数率/(¹³¹I-VEGF抗体产品峰的放射性计数率+游离¹³¹I峰的放射性计数率)×100％。

2.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤1)中的氯胺T溶液及Na₂S₂O₅溶液浓度均为0.5～2g/L。

3.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤1)中的所取VEGF抗体浓度为1～5g/L，体积为1～5μl。

4.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤1)中的向EP管中加入的Na¹³¹I溶液为7.4～22.2M Bq，PB液为50μl(0.05mol/L)，氯胺T溶液为50μl。

5.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤1)中的电磁搅拌器搅拌时间为0.5～3min。

6.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤1)中的终止液Na₂S₂O₅为30～100μl。

7.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤2)中的的加入的PB液为2～4ml。

8.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤2)中的洗脱速度为5～15滴/min。

9.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤2)中的用EP管收集的流出液体积为0.5ml。

10.根据权利要求1所述的一种新的肿瘤标记方法，其特征在于，所述步骤3)中的所取反应管内的标记液和¹³¹I-VEGF抗体峰产品量为3～5μl。