[发明专利]一种H3N2亚型犬流感病毒鼠适应强毒株及其应用

说明书

本发明公开了一种H3N2亚型犬流感病毒鼠适应强毒株及其应用。本发明采用病毒分离、培养、感染动物等技术，通过小鼠适应获得增强毒力及致病致死性氨基酸突变及缺失，获得了H3N2亚型犬流感病毒鼠适应强毒株，该适应株能够引起小鼠致死性感染，为疫苗的研发、预防及治疗药物等效果评价，流感病毒感染，致病/和致死机制研究提供了有力的动物模型。此外，由于该鼠适应强毒株，其HA基因未出现突变，其抗原性未改变，可作为制备和/或基于抗体水平检测等基础实验研究用抗原。综上，本发明的适应强毒株，为研发H3N2亚型犬流感病毒疫苗及高效预防和/或治疗药物的筛选，感染，增强毒力等机制的研究提供了有力的技术支持。

技术领域

本发明涉及一种犬流感病毒毒株，尤其涉及一种H3N2亚型犬流感病毒鼠适应强毒株及其应用，属于微生物工程技术领域。

背景技术

流感病毒(Influenza virus，IV)为正粘病毒科，直径为80～120nm，其结构由内向外分为核蛋白(NP)，基质蛋白(M)，包膜三个部分。其基因组RNA由8个节段的单链RNA组成，分别为PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS基因。目前己经发现的A型流感病毒具有18种HA亚型和11种NA亚型，其中H1～H16HA亚型和N1～N9NA亚型均来源于禽流感，而H17N10亚型和H18N11亚型仅见于蝙蝠。目前能够引起犬类感染的有H3、H6、H9亚型流感病毒，其中H3亚型已被确认为能够在体内稳定传播的特有毒株，被称为犬流感病毒(Canine influenza virus，CIVs)，分别来自马源H3N8和禽源H3N2。

中国、韩国和泰国主要流行株以禽源H3N2犬流感病毒为主，而欧美流行株多为马源H3N8亚型。自2006年韩国首次报道了由禽源H3N2流感病毒直接跨种感染犬，并在犬中传播扩散，与此同时中国、泰国也先后报道了该病的发生。近年来H3N2 CIVs在亚洲地区广泛流行，该毒株不仅发生在狗场，救护中心，宠物犬中也常有发生。2011年以前犬流感仅在我国南方流行，近年来逐渐由南方向北方扩散，并引起全国大范围流行。

H3N2 CIVs主要引起犬的呼吸道疾病，临床表现较为温和，大多在发病几天后便可恢复，在临床上较容易被忽视。但实验条件下，感染犬2-3周后仍可检测到少量的RNA和具有低感染能力的病毒。这为流感病毒在狗体内传播和进一步适应提供了机会，存在较为严重的潜在公共卫生风险。此外，在无继发细菌等感染的情况下，犬流感病毒在犬体内引起的临床症状较为温和，疫苗/药物等研制过程中评估效果存在一定的困难，因此目前获得稳定的动物感染模型和攻毒用强毒株尤为重要。但至今还未见有H3N2CIVs通过小鼠体内连续传代获得的适应性突变及致死性增强病毒株的报道。

发明内容

本发明针对目前预防及治疗犬流感药物、免疫用疫苗的评价模型的不足，对H3N2CIVs进行了相关研究，证实H3N2 CIVs能够引起小鼠体内感染，但不表现任何临床症状，通过小鼠适应获得一种H3N2亚型犬流感病毒鼠适应强毒株及其应用，该适应株为犬流感病毒疫苗的研发、预防及治疗药物等效果评价，流感病毒感染，致病/和致死机制研究提供了有力的动物模型。

本发明的目的之一是，提供一种H3N2亚型犬流感病毒鼠适应强毒株。

以及提供一种H3N2亚型犬流感病毒鼠适应强毒株的制备方法。

本发明的目的之二是，提供一种H3N2亚型犬流感病毒鼠适应强毒株的应用。包括：

作为一种强毒株在建立H3N2亚型犬流感病毒致病或致死动物感染模型中的应用。

以及作为一种检测用抗原在H3N2亚型犬流感病毒疫苗的免疫效果评价抗体水平检测中的应用。

以及作为实验材料在犬流感病感染机制和/或致死机制研究中的应用。

以及作为实验材料在获得适应细胞系MDCK发生病变及提高增殖滴度H3N2亚型犬流感病毒毒株中的应用。