[发明专利]一种能区分猪细小病毒1-7型的分型检测的LAMP的引物组合、检测方法及试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种能区分猪细小病毒1‑7型的分型检测的LAMP的引物组合、检测方法及试剂盒。本发明分别利用猪细小病毒NS1基因和NP2基因的保守区段设计多套LAMP引物，筛选出特异性好，灵敏度高的能区分猪细小病毒1‑7型的分型检测的引物组合。所述引物组合能分别检测猪细小病毒1‑7型，并且与猪源其它病毒无交叉反应。本发明在LAMP反应体系中加入荧光染料，可实现一步法检测猪细小病毒1‑7型，结合荧光定量实现全程实时监控，1小时之内即可出结果，检测灵敏度可以达到100拷贝/μL。本发明所述检测方法既具有简便、快速、灵敏、特异的优势，又避免了人为判定引起的误差以及开盖引起的环境污染。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种能区分猪细小病毒1-7型的分型检测的LAMP的引物组合、检测方法及试剂盒，用于检测区分猪细小病毒1-7型。

背景技术

猪细小病毒(porcine parvovirus)是引起妊娠母猪繁殖障碍的主要病原体之一，其特征是受感染的母猪特别是初产母猪表现为流产、产出死胎、木乃伊胎儿和畸形胎儿，或产仔数少，有时还可导致公、母猪不育。猪细小病毒具有很高的感染性，易感的健康猪群一旦病毒传入，3个月内几乎可导致猪群100％感染；感染群的猪只较长时间保持血清学反应阳性。猪细小病毒病多发生于春、夏季节或母猪产仔和交配季节。母猪怀孕早期感染时，胚胎、胎猪死亡率可高达80％～100％。母猪在怀孕期的前30～40天最易感染，孕期不同时间感染分别会造成死胎、流产、木乃伊、产弱仔猪和母猪久配不孕等不同症状。因此，在早期快速、准确鉴定猪细小病毒对于控制病毒蔓延具有重要意义。

Mary与Mahnel在1966年首次发现了猪细小病毒，而后该病毒发展到世界多个国家和地区。在20世纪80年代，我国的多个地方都分离发现猪细小病毒病。经典的猪细小病毒病是由猪细小病毒1型(Porcine parvovirus type 1，PPV1)感染引起的。2001年tiijikata等在缅甸进行戊型肝炎调查时从猪血清中发现猪细小病毒2型(PPV2)。2008年，一种新的猪细小病毒，hokovirus(PHoV)在香港确认，其基因组序列与人细小病毒4(PARV4)和牛hokovirus(BHoP)密切相关，即为猪细小病毒3型(PPV3)。PPV4是2005年从美国北卡罗莱纳州感染猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus associated disease，PCVAD)的猪群中发现的，随后中国也有报道。2013年，Xiao等在美国猪群中发现了一种新型PPV，暂命名为PPV5，该病毒具有典型的细小病毒基因组结构。2014年12月，我国学者采用序列独立性单引物扩增方法，从流产的猪胎儿体内获得了一种不同于以往的细小病毒，暂命名为PPV6。2016年通过宏基因组测序方法首次在美国猪群中被鉴定出PPV7，PPV7是一种高度分化的新型细小病毒，2017年在中国也发现了PPV7病毒的存在。序列比对发现PPV7与其它细小病毒的NS1序列同源性不超过17％。由于新型毒株的不断发现，猪细小病毒分型检测对于病毒遗传进化、分子流行病学调查监控、病理学研究以及疫情的防范控制具有重要意义，而目前关于猪细小病毒1-7型分型检测研究还未见报道。