[发明专利]一种基于DNA链置换的SERS-荧光双模探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种基于DNA链置换的SERS-荧光双模探针，其特征在于，所述探针是由一定粒径的四氧化三铁磁性复合材料修饰的DNA_1-2双链与另一条DNA₃单链互补配对制得；所述四氧化三铁磁性复合材料为Fe₃O₄@Au；所述Fe₃O₄@Au的粒径为50～150nm；所述DNA₁和DNA₃含相同的适配体，所述DNA₂末端修饰有荧光团FAM6，所述DNA₃末端修饰有荧光团Cy5；所述的基于DNA链置换的SERS-荧光双模探针的制备方法，包括以下步骤：

1)Fe₃O₄的制备；

2)Fe₃O₄@Au的制备：

2a)Fe₃O₄-DA的制备：称取10～30mg Fe₃O₄溶于THF中，加入2mL盐酸多巴胺水溶液，超声均匀，室温搅拌过夜，离心除去多余DA备用；

2b)金种的制备：将30～60μL 25mM的1％HAuCl₄溶液加入到30～60mL水溶液(含5～20μL的80％THPC溶液和250μL 2M的NaOH溶液)中，避光条件下连续搅拌至过夜，备用；2c)生长液的制备：1～3mL 1％HAuCl₄加入溶有10～30mg K₂CO₃的100mL水中，放置过夜备用；

2d)吸附：将10～20mL金种加入5～10mL Fe₃O₄-DA中，调节pH到4.0，振摇过夜，磁分离除去多余的Au；

2e)生长：将80～100mL生长液在搅拌条件下加入5～10mL Fe₃O₄-DA-Au中，用盐酸羟胺作为还原剂，逐滴加入至蓝色；

得到Fe₃O₄@Au，所述Fe₃O₄@Au的粒径为100±5nm；

3)SERS-荧光双模探针的制备：

3a)DNA_1-2双链与DNA₃单链的制备；

3b)DNA_1-2双链修饰Fe₃O₄@Au磁性复合材料，所述Fe₃O₄@Au与DNA_1-2分子的摩尔比为1:200。

2.根据权利要求1所述的基于DNA链置换的SERS-荧光双模探针，其特征在于，DNA链长度为20～50base。

3.权利要求1-2所述基于DNA链置换的SERS-荧光双模探针在对细胞内活性物质的SERS定量检测中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用中SERS定量检测包括以下步骤：待细胞生长至对数期后，将一定量的细胞接种到无菌石英片上，待细胞完全贴壁后，吸出旧培养基并加入充分混匀含Fe₃O₄@Au修饰的DNA_1-2双模探针的培养基；细胞共培养一段时间后吸出旧培养基并用PBS清洗，然后加入混有相同浓度的DNA₃的基本培养基，共培养一段时间后吸出旧培养基，用PBS清洗后马上进行SERS成像。

5.权利要求1-2所述基于DNA链置换的SERS-荧光双模探针在对细胞内活性物质的定性荧光成像分析中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用中荧光分析包括如下步骤：待细胞生长至对数期后，将一定量的细胞接种到荧光共聚焦皿上，待细胞完全贴壁后，吸出旧培养基并加入充分混匀含Fe₃O₄@Au修饰的DNA_1-2双模探针的培养基；细胞共培养一段时间后吸出旧培养基并用PBS清洗，然后加入混有相同浓度的DNA₃的基本培养基，共培养一段时间后吸出旧培养基，用PBS清洗，再经DAPI染色并用PBS清洗后马上进行荧光成像。