[发明专利]一种成纤维细胞生长因子-18的生产方法及在制备促毛发制剂方面的应用在审
| 申请号： | 201910683815.7 | 申请日： | 2019-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN110551200A | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 许诺;李校堃;胡振林;高爽;王云鹏;佟海滨;李世军;丁明;王宝慧;祁均梅;林豪杰;陈毓;李雪囡 | 申请（专利权）人： | 温州大学 |
| 主分类号： | C07K14/50 | 分类号： | C07K14/50;C12N15/12;C12N15/82;A61K38/18;A61P17/14 |
| 代理公司： | 33258 温州名创知识产权代理有限公司 | 代理人： | 陈加利 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市瓯*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 成纤维细胞生长因子 烟草 大肠杆菌系统 植物表达载体 动物反应器 生物反应器 基因序列 毛发再生 小鼠模型 植物生产 脱发 毛发 制备 生产 应用 蛋白 | ||
1.一种成纤维细胞生长因子-18，其特征在于：该基因的编码方式具有符合烟草密码子偏好性的特质，命名为FGF-18，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种用于生产权利要求1所述成纤维细胞生长因子-18的植物叶绿体表达载体，其特征在于：该载体以商业化的pCAMBIA3301为骨架将GUS基因替换成烟草密码子偏好性的FGF-18基因，并在5’-UTR区加入了68bp的Ω增强子序列构建的载体，命名为pNT3301-FGF18。
3.一种携带权利要求2所述的载体，其特征在于：该载体为携带所述植物表达载体pNT3301-FGF18的农杆菌EHA105。
4.一种利用烟草作为植物反应器生产成纤维细胞生长因子-18的方法，其特征在于：所述的成纤维细胞生长因子-18如权利要求1所示。
5.根据权利要求3所示的一种方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)构建植物表达载体pNT3301-FGF18；
(2)利用烟草高通量遗传转化技术实现FGF18基因对烟草的遗传转化，获得大量烟草抗性植株；
(3)利用高通量筛选技术，即Taqman PCR和western点杂交对烟草抗性植株进行鉴定，筛选出拷贝数低、表达量高的转基因株系，并通过标准的southern和western杂交对其进行鉴定，ELISA进行定量。
6.一种含有权利要求4所述的成纤维细胞生长因子-18在用于制备出毛发再生制剂。
7.根据权利要求6所述的制剂，其特征在于：该制剂还包括有医学或药学上可接受的载体或者添加剂。
8.根据权利要求6所述的制剂，其特征在于：还包括有棕榈酸、乙醇和苄索氯铵。
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