[发明专利]一种负载菲咯啉钌的DNA纳米线团的制备方法

权利要求书

1.一种负载菲咯啉钌的DNA纳米线团的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）设计回文序列编码的滚环扩增RCA反应模板链及相应的引物链；

（2）用DNA连接酶对RCA模板链进行连接环化，获得环化的模板链；

（3）启动RCA扩增反应，用其产物自组装合成三维球状的DNA纳米线团DNA NCs；

（4）将菲咯啉钌高效率负载到DNA NCs的双链结构中制备ECL信标分子。

2.根据权利要求1所述的一种负载菲咯啉钌的DNA纳米线团的制备方法，其特征在于：步骤（1）中RCA扩增模板链序列从左到右5’到3’：磷酸化-GGGCACGGGCAGCTTGCCGGTGGAAGCTAGATGCATCTAGCAAGCGCCGCCACTGATTTCACCGCTTCAAGCTAGATGCATCTAGCAAT。

3.根据权利要求1所述的一种负载菲咯啉钌的DNA纳米线团的制备方法，其特征在于：步骤（1）中RCA扩增的引物链序列为从左到右5’到3’：GTGGCGGCGC。

4.根据权利要求1所述的一种负载菲咯啉钌的DNA纳米线团的制备方法，其特征在于：步骤（2）中用DNA连接酶对RCA模板链的连接环化的具体方法如下：体系中，模板链、CircLigase II ssDNA连接酶、氯化锰和甜菜碱的终浓度分别为0.50μM，5.0 UμL^-1，2.5 mM，1.0 M，连接反应温度为60 °C，时间为1小时。

5.根据权利要求1所述的一种负载菲咯啉钌的DNA纳米线团的制备方法，其特征在于：步骤（3）中RCA扩增反应步骤如下：在100μL的扩增反应液中加入浓度为0.5μM的环化的模板链2μL与10μM的引物链5μL，进行RCA反应以获得DNA NCs，扩增反应液包括终浓度0.40 mMdNTPs、0.01wt% BSA、8.0 U Bst DNA聚合酶及缓冲液1，所述缓冲液1含有终浓度10 mM 的Tris-HCl、50 mM NaCl、10 mM MgCl₂，pH 7.9。

6.根据权利要求1所述的一种负载菲咯啉钌的DNA纳米线团的制备方法，其特征在于：步骤（3）中RCA扩增反应的温度为63 ℃，时间为17小时。

7.根据权利要求1所述的一种负载菲咯啉钌的DNA纳米线团的制备方法，其特征在于：步骤（4）中的ECL信标分子制备，包括如下步骤：

（1）取10 uL DNA纳米线团DNA NCs与1.0 uL 浓度为10 mM的菲咯啉钌混合并加入到380μL缓冲液1中；

（2）置于4 ℃孵育3小时；

（3）将上述溶液转移到3 K超滤离心管中，置于冷冻离心机以10700 rpm转速离心20分钟，制备得到DNA NCs-Ru(phen)₃²⁺信标；

（4）收集制备好的DNA NCs-Ru(phen)₃²⁺信标于干净的离心管中，并在4 ℃下储存待用。