[发明专利]一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒，其含有一种用于检测非洲猪瘟的引物组，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；其中，上游引物标记Biotin，下游引物标记FITC。本发明通过组织裂解液直接获取病毒DNA，无需核酸抽提步骤；通过高效核酸扩增酶减少PCR反应时间；对引物进行标记，通过核酸试纸条显色方法替代核酸琼脂糖电泳显色方法。本发明建立了适合临床使用的高效、快检非洲猪瘟病毒的方法，并且与传统的琼脂糖凝胶电泳方法相比，无需任何仪器设备,操作简单，具有更高的灵敏性。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，更具体地，涉及一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒

背景技术

非洲猪瘟(African Swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine fevervirus，ASFV)引起的一种烈性、热性、高度致死性传染病。该病毒属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)，可通过节肢动物进行传播，被世界动物卫生组织列为A类动物传染病，被我国列为一类动物传染病。自2018年8月，我国首次出现以来，已经累计出现疫情120余例。截止至2019年5月12日，我国仅有澳门、台湾未出现发病病例。该病已对我国生猪产业赞成巨大经济损失，采取科学的手段对其防控迫在眉睫。目前针对该病没有有效的疫苗，因此采取系统的生物安全手段加强防控十分重要，同时对猪只进行常规监测和检测亦，及时精确淘汰发病猪只亦可减少经济损失。目前主要采用分子生物方法和免疫方法对该病毒核酸及蛋白进行检测。由于在受到临床样本保存条件、运输条件和单克隆抗体特异性的制约，免疫学检测方法的灵敏性受到大大的影响。常用的分子生物方法主要有荧光定量PCR检测方法、常规PCR检测方法及核酸等温扩增检测方法。其中荧光定量PCR方法一次性投入高，单次检测成本高；等温扩增方法易污染，需配合DNA抽提步骤，耗时久；而常规PCR方法存在结果展示步骤繁琐的缺点。

因此目前缺乏一种适合屠宰场、生猪养殖场等非专业临床检测实验室使用的快速、便捷的非洲猪瘟病毒检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒。

本发明的第一个目的是提供一种用于检测非洲猪瘟的引物组。

本发明的第二个目的是提供所述引物组在制备非洲猪瘟检测试剂盒中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种检测非洲猪瘟的试剂盒。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种用于检测非洲猪瘟的引物组，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选地，所述的上游引物标记Biotin，下游引物标记FITC。

所述引物组在制备非洲猪瘟检测试剂盒中的应用。

优选地，所述的试剂盒含有任一所述的引物组。

优选地，所述的试剂盒为核酸试纸条试剂盒。

优选地，所述的试剂盒还含有PCR扩增试剂。

优选地，所述PCR扩增试剂为2×PCR Buffer、2mM dNTPs、1U/μL的Marathon DNA聚合酶和超纯水。

优选地，PCR扩增的体系为：2×PCR Buffer 25μL，2mM dNTPs 10μL，10μM上游引物0.5μL，10μM下游引物0.5μL，1U/μL Marathon DNA聚合酶1μL，模板2μL，补超纯水至50μL。

优选地，PCR扩增的程序为：94℃预变性2分钟；98℃变性10秒，60～63℃退火30秒，72℃延伸30秒，30个循环。