[发明专利]用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记、引物、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记、引物、试剂盒及应用，属于分子生物学技术领域。该分子标记的序列如如SEQ ID NO.1所示。采用本申请所述荧光定量PCR方法进行灵敏性检测时，其灵敏度可达1.16×10²拷贝/uL；同时，经荧光定量PCR稳定性实验发现，组内和组间实验变异系数均小于4.9％，具有较好的重复性；而且通过本申请所述荧光定量PCR方法仅对ALV‑F有良好的扩增作用，具有较好的特异性。利用本申请提供的特异性引物进行ALV‑F荧光定量PCR检测，特异性好、准确性高、重复性好，可快速、简便、高效地鉴定ALV‑F，能够应用于临床标本的检测，适合大范围推广应用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记、引物、试剂盒及应用。

背景技术

禽白血病(Avian leukosis，AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus，ALV)引起的禽类多种良性和恶性肿瘤性疾病。临床上多以免疫抑制、生长抑制和多器官组织出现肿瘤等为主要特征，其传播主要通过垂直传播，此外，由于一些弱毒疫苗中污染了ALV也给规模化养鸡业和家禽疫苗产业带来了巨大的危害。目前尚未见有有效药物可以治疗AL，也未见有有效的商品化疫苗可以预防AL，其防控策略主要是淘汰阳性鸡群，建立无禽白血病的健康鸡群，另外可运用基因敲除技术筛选出遗传抗性的鸡。F亚群ALV首次从环颈雉鸡中分离到，F亚群代表是在野鸡发现的内源性ALV，临床上不导致肿瘤的发生，但是F亚群ALV在人工条件下感染SPF鸡可导致鸡的肺脏功能异常和一定比例的淋巴细胞肿瘤，虽然临床发生肿瘤概率低，但AL的亚临床感染作用比临床上肿瘤性死亡带来的经济损失更大。

目前检测ALV的方法多样，常用方法有病毒分离鉴定、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光实验(IFA)、聚合酶链式反应(PCR)、荧光定量PCR等。病毒的分离与鉴定是目前最有效、最可靠的检测方法，该方法对操作水平要求较高，费时、成本高、适合于实验室检测，却不适于临床应用推广。ELISA方法是一种快速、敏感性高、特异性强的检测方法，可在短时间内大批量检测样本，是最常用的检测方法之一。但其针对ALV的保守蛋白p27，p27氨基酸序列在内源性和外源性ALV中均高度保守，因此检测结果容易出现假阳性。IFA方法虽然特异性强，但需要特定的单克隆抗体且对检测人员的专业能力要求较高，故不适宜在临床上推广应用。PCR方法具有灵敏度高、特异性强的特点，能够对微量的DNA或RNA进行检测，但是不能对病毒载量进行定量。而荧光定量PCR灵敏性高、特异性好，可对靶基因进行实时定量，现已广泛运用于食品病原微生物、分子靶基因干扰等分子生物和医学领域。

荧光定量PCR不仅保持了PCR方法的特点，而且提高了其特异性和准确性，另外可通过软件进行数据的分析和处理，使结果更加客观和准确，该方法已经广泛运用于疾病的临床检测和医学领域。目前，尚未见有ALV-F的荧光定量PCR的方法。

发明内容

本申请的首要目的在于提供一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记。

本申请的另一目的在于提供一种用于检测F亚群禽白血病病毒的引物。

本申请的再一目的在于提供一种用于检测F亚群禽白血病病毒的试剂盒。

本申请的第四目的在于提供上述用于检测F亚群禽白血病病毒的引物和试剂盒的应用。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记，其序列如下(SEQ ID NO.1)所示：

CCTACAACTGACCCTACGGCGGGGGGATGTATAGGGTTCGCCCCATATTCAAAGCCGGCCGGCATCTACGGGTGGGACCGCAAGGGAATGGCGCATAACTTCCTGATAGCCCCATGGTCTAA。