[发明专利]用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记、引物、试剂盒及应用有效
申请号: | 201910690093.8 | 申请日: | 2019-07-29 |
公开(公告)号: | CN110438261B | 公开(公告)日: | 2022-08-12 |
发明(设计)人: | 曹伟胜;严立福;陈建 | 申请(专利权)人: | 华南农业大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 苏运贞 |
地址: | 510642 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 检测 亚群禽 白血病病毒 分子 标记 引物 试剂盒 应用 | ||
本发明公开了一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记、引物、试剂盒及应用,属于分子生物学技术领域。该分子标记的序列如如SEQ ID NO.1所示。采用本申请所述荧光定量PCR方法进行灵敏性检测时,其灵敏度可达1.16×102拷贝/uL;同时,经荧光定量PCR稳定性实验发现,组内和组间实验变异系数均小于4.9%,具有较好的重复性;而且通过本申请所述荧光定量PCR方法仅对ALV‑F有良好的扩增作用,具有较好的特异性。利用本申请提供的特异性引物进行ALV‑F荧光定量PCR检测,特异性好、准确性高、重复性好,可快速、简便、高效地鉴定ALV‑F,能够应用于临床标本的检测,适合大范围推广应用。
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域,具体涉及一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记、引物、试剂盒及应用。
背景技术
禽白血病(Avian leukosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽类多种良性和恶性肿瘤性疾病。临床上多以免疫抑制、生长抑制和多器官组织出现肿瘤等为主要特征,其传播主要通过垂直传播,此外,由于一些弱毒疫苗中污染了ALV也给规模化养鸡业和家禽疫苗产业带来了巨大的危害。目前尚未见有有效药物可以治疗AL,也未见有有效的商品化疫苗可以预防AL,其防控策略主要是淘汰阳性鸡群,建立无禽白血病的健康鸡群,另外可运用基因敲除技术筛选出遗传抗性的鸡。F亚群ALV首次从环颈雉鸡中分离到,F亚群代表是在野鸡发现的内源性ALV,临床上不导致肿瘤的发生,但是F亚群ALV在人工条件下感染SPF鸡可导致鸡的肺脏功能异常和一定比例的淋巴细胞肿瘤,虽然临床发生肿瘤概率低,但AL的亚临床感染作用比临床上肿瘤性死亡带来的经济损失更大。
目前检测ALV的方法多样,常用方法有病毒分离鉴定、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光实验(IFA)、聚合酶链式反应(PCR)、荧光定量PCR等。病毒的分离与鉴定是目前最有效、最可靠的检测方法,该方法对操作水平要求较高,费时、成本高、适合于实验室检测,却不适于临床应用推广。ELISA方法是一种快速、敏感性高、特异性强的检测方法,可在短时间内大批量检测样本,是最常用的检测方法之一。但其针对ALV的保守蛋白p27,p27氨基酸序列在内源性和外源性ALV中均高度保守,因此检测结果容易出现假阳性。IFA方法虽然特异性强,但需要特定的单克隆抗体且对检测人员的专业能力要求较高,故不适宜在临床上推广应用。PCR方法具有灵敏度高、特异性强的特点,能够对微量的DNA或RNA进行检测,但是不能对病毒载量进行定量。而荧光定量PCR灵敏性高、特异性好,可对靶基因进行实时定量,现已广泛运用于食品病原微生物、分子靶基因干扰等分子生物和医学领域。
荧光定量PCR不仅保持了PCR方法的特点,而且提高了其特异性和准确性,另外可通过软件进行数据的分析和处理,使结果更加客观和准确,该方法已经广泛运用于疾病的临床检测和医学领域。目前,尚未见有ALV-F的荧光定量PCR的方法。
发明内容
本申请的首要目的在于提供一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记。
本申请的另一目的在于提供一种用于检测F亚群禽白血病病毒的引物。
本申请的再一目的在于提供一种用于检测F亚群禽白血病病毒的试剂盒。
本申请的第四目的在于提供上述用于检测F亚群禽白血病病毒的引物和试剂盒的应用。
为实现上述目的,本发明通过以下技术方案予以实现:
一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记,其序列如下(SEQ ID NO.1)所示:
CCTACAACTGACCCTACGGCGGGGGGATGTATAGGGTTCGCCCCATATTCAAAGCCGGCCGGCATCTACGGGTGGGACCGCAAGGGAATGGCGCATAACTTCCTGATAGCCCCATGGTCTAA。
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