[发明专利]薄壳山核桃黑斑病菌的padlock探针及其检测方法

说明书

本发明涉及检测薄壳山核桃黑斑病菌(Pestalotiopsis microspora)的padlock探针及其检测方法，属于生物技术领域。用于检测薄壳山核桃黑斑病菌的padlock探针P‑Pm，其特征在于，所述探针P‑Pm的序列为：P‑Pm:5’‑GCGCATGGAAATGTCCAGAGTGCAGGGGCTCGACCGTTAGCAGCATGACCGAGATGTACCGCTATCGTacgtcgtattaggtagtcacTCTCACAGAACCAG‑3’。以此探针为基础的检测试剂盒具较强的特异性、灵敏性及稳定性，为薄壳山核桃黑斑病菌检测提供了快速、灵敏、特异的技术方法。

技术领域

本发明涉及检测薄壳山核桃黑斑病菌(Pestalotiopsis microspora) 的padlock探针及其检测方法，属于生物技术领域。适用于口岸检验检疫、农林业生产、植物保护等部门使用。

背景技术

薄壳山核桃（Carya illinoinensis ）也称美国山核桃，为胡桃科山核桃属落叶大乔木，学名长山核桃，喜光、喜温暖湿润气候，适应性强，丘陵山区、沿海滩涂、低洼湿地均能生长，且果材兼用，是平原绿化的优选树种（彭方仁等，2012；巨云为等，2014；杨建华等，2007；田爱梅等，2002）。薄壳山核桃是世界上著名的干果之一，作为一种营养保健食品越来越受到大众的喜爱。我国从20世纪初开始引种薄壳山核桃，目前主要分布在浙江、江苏，云南等地。

薄壳山核桃黑斑病主要为害果实、叶片、嫩枝、叶柄、 花序，病害一旦发生，果实产量可达10%-40%，严重影响薄壳山核桃果实的产量和品质。目前，该病害已在我国浙江，江苏等地发生（戚钱钱等，2016）。薄壳山核桃黑斑病病原菌为小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora(Speg.)。目前关于小孢拟盘多毛孢的鉴定方法，主要通过病原菌的培养和形态特征及其 ITS 序列测序等方法判断。传统的病原菌检疫检测技术主要是以病原生物形态特征为主的传统检测方法。这种方法耗时较长而且效率非常低，通常需要将疑似携带病原菌的材料或发病植物组织进行分离培养纯化，然后将纯培养的病原生物回接到寄生植物上，进一步在室内通过形态学和生理学性状进行病原物鉴定，这种方法不但耗时较长，检出率不高，此外鉴定时还受到其他因子的干扰，如专性寄生的病原菌无法培养，近似种依据形态与生物学特征难以鉴别等。因此传统检测方法无法满足口岸检疫、田间检疫和健康种苗生产的需要。