[发明专利]克胰素的合成方法和应用

说明书

本发明涉及克胰素技术领域，具体提供一种克胰素的合成方法和应用。该合成方法包括：提供包括第1～11位氨基酸的肽片段1、包括第12～24位氨基酸的肽片段2、包括第25～33位氨基酸的肽片段3、包括第34～39位氨基酸的肽片段4、包括第40～55位氨基酸的肽片段5；将肽片段4、3和2逐步偶联，并脱除第13位和第35位半胱氨酸的保护基，氧化得到含一对二硫键的全保护肽片段8，将肽片段5、8和1逐步偶联，得到全保护的克胰素肽片段10，经裂解、氧化形成第4位和第52位半胱氨酸连接的二硫键，脱除第27位和第48位半胱氨酸上的保护基，氧化，得到克胰素。本合成方法具有工艺稳定性好，合成效率高，纯度高等特点。

技术领域

本发明属于克胰素技术领域，尤其涉及一种克胰素的合成方法和应用。

背景技术

虎纹克胰肽(HWTX-XI)是第一个从蜘蛛毒素中分离的具有Kunitz型结构模体的胰蛋白酶抑制剂，其由55个氨基酸残基组成，其中6个半胱氨酸形成3对二硫键，相对分子质量为6166.2Da，是迄今为止发现的胰蛋白酶抑制活性最强的天然多肽，其抑制活性是较经典的胰蛋白酶抑制剂BPTI强两个数量级，同时其抑制活性专一性要高于后者，表明HWTX-XI在治疗与胰蛋白酶相关的疾病中有较好的应用前景。

目前克胰肽的制备仍然处在实验室研究阶段，而且制备的研究主要侧重在利用发酵技术领域，目前尚未看到有化学合成方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种克胰素的合成方法，该合成方法为化学合成方法，突破现有仅有发酵生产的方法，以适应市场巨大需求。

进一步地，本发明还提供该克胰素在作为胰蛋白酶抑制剂组分的应用。

本发明是这样实现的：

一种克胰素的合成方法，包括以下步骤：

步骤S01.提供肽片段1、肽片段2、肽片段3、肽片段4、肽片段5；

其中，肽片段1包含克胰素主链序列中的第1-11位氨基酸和载体；

肽片段2包含克胰素主链序列中的第12-24位氨基酸和载体；

肽片段3包含克胰素主链序列中的第25-33位氨基酸和载体；

肽片段4包含克胰素主链序列中的第34-39位氨基酸和载体；

肽片段5包含克胰素主链序列中的第40-55位氨基酸和载体；

步骤S02.在裂解液作用下，分别将肽片段1、肽片段2、肽片段3从载体上裂解，得到全保护肽片段1’、肽片段2’、肽片段3’；脱除肽片段4上的氨基保护基，在缩合剂和活化剂的作用下，使肽片段3’与肽片段4发生偶联，得到肽片段6；脱除肽片段6的氨基保护基，在缩合剂与活化剂的作用下，使肽片段1’与肽片段6发生偶联，得到肽片段7；

步骤S03.在裂解液作用下，将肽片段7从载体上裂解，得到全保护肽片段7’；对肽片段7’进行氧化处理，使得肽片段7’上的第7位半胱氨酸和第13位半胱氨酸上的保护基脱除，并氧化连接成全保护肽片段8；

步骤S04.脱除肽片段5上的氨基保护基，在缩合剂与活化剂的作用下，使肽片段5和肽片段8发生偶合，得到肽片段9；在缩合剂与活化剂的作用下，使得肽片段9和肽片段1发生偶合，得到肽片段10；

步骤S05.在裂解液作用下，使得肽片段10从载体上裂解，得到肽片段11；

步骤S06.对肽片段11进行氧化处理，使得肽片段11上第4位半胱氨酸与第52位半胱氨酸氧化连接，得到肽片段12；

步骤S07.对肽片段12进行氧化处理，使得肽片段12的第27位半胱氨酸和第48位半胱氨酸上的保护基脱除并发生氧化连接，得到克胰素。