[发明专利]一种用于检测ADRB1基因多态性的探针、引物及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测ADRB1基因多态性的探针，该探针的序列如SEQ ID NO.:1所示，或者在SEQ ID NO.:1的序列两端加以基团修饰。本发明还提供了一种用于检测ADRB1基因多态性的引物，该引物的序列如SEQ ID NO.:2和SEQ ID NO.:3所示。本发明的用于检测ADRB1基因多态性的探针和引物，在检测ADRB1基因多态性时，具有灵敏度高、特异性好、快速、高通量检测等优点。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及用于检测ADRB1基因多态性的探针、引物及试剂盒。

背景技术

β肾上腺素受体(β-adrenergic receptor)为肾上腺素受体的一个亚家族，属于G蛋白偶联受体超家族，包含β₁、β₂和β₃三种不同亚型。该类受体通过与Gs蛋白偶联调节细胞内cAMP和L型Ca²⁺通道的开放频率，是β受体激动剂和β受体阻滞剂的作用靶点。β₁受体编码基因ADRB1多态性可影响β受体阻断剂如美托洛尔的疗效。ADRB1Gly389Arg(rs1801253)多态性导致位点Arg389和Gly389两种类型的受体，其中Arg389型受体与G蛋白偶联效率高于Gly389型受体。Arg389纯合子高血压患者应用美托洛尔后血压下降的程度是Gly389Arg杂合子基因型个体的3倍；Arg389纯合子基因型心衰患者应用卡维地洛和美托洛尔治疗后左室射血分数改善情况更佳。建议临床医师在应用β₁受体阻滞药前进行ADRB1多态性检测，并根据其基因型调整用药剂量，以提高疗效，减少不良反应的发生。

目前普遍应用的突变检测方法为DNA直接测序法，PCR产物直接进行DNA序列分析，可以明确突变位点，但存在费时费力，成本较昂贵，不适用于对大量样本进行检测等缺点。因此，需要开发一种适合大批量样本检测的方法。

发明内容

本发明的目的首先在于提供一种用于检测ADRB1基因多态性的探针，该探针的序列如SEQ ID NO.:1所示，或者在SEQ ID NO.:1的序列两端加以基团修饰；

其中修饰基团为：5′的修饰基团为荧光基团，如FAM；3′的修饰基团为淬灭基团，如Dabcyl；

具体的说，本发明提供的用于检测ADRB1基因多态性的探针为：5′-FAM-CCGCAAGGCCTTCCAGNGACTGCTCTGCGG-Dabcyl-3′；

其中N为变异碱基，具体为GC；

所述的探针包括环序列和茎序列，其中环序列为第6～25bp(5′-AGGCCTTCCAGNGACTGCTC-3′)，其两侧是两个反向互补的茎序列，茎序列为(5′-CCGCA……TGCGG-3)。

该探针的设计原理为：根据ADRB1基因多态性rs1801253，设计探针和引物，需要保证在退火温度下DNA模板不存在时，探针呈茎环状态。探针所采用的淬灭基团为Dabcyl，其淬灭空间范围很小，搭配短发射波长的荧光基团，如FAM，只有当分子信标呈茎环结构时，荧光才会被很好地淬灭。环序列与靶DNA序列互补时，确定最佳PCR引物为40-45bp大小，PCR产物长度100-150bp。

本发明还提供了一种用于检测ADRB1基因多态性的引物，该引物的序列如SEQ IDNO.:2(引物1)和SEQ ID NO.:3(引物2)所示：

引物1 5′-AGGTGACACTATAGAATAGCCTTCAACCCCATCATCTA-3′

引物2 5′-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACAGGCTCGAGTCGCTGTC-3′。