[发明专利]牛乳中霉菌毒素及重金属快速量子点免疫荧光检测方法

说明书

本发明公开了牛乳中霉菌毒素及重金属快速量子点免疫荧光检测方法，属于免疫化学检测技术领域，包括以下步骤：A、牛乳的预处理：将牛乳样品与稀释液均质混匀，进行离心处理，取上清液作为样品溶液，备用；将牛乳样品进行消解，与螯合剂混合，形成的螯合物，备用；B、样品滴加：将样品溶液滴加到黄曲霉毒素检测卡条上；将螯合物滴加到重金属检测卡条上；C、测定：利用荧光分析仪读取检测线、控制线处的荧光强度；D、结果计算：荧光分析仪计算出牛乳中黄曲霉毒素、重金属的含量。简便易操作，检测结果读取快速，检测限低，精确度高，检测成本低，操作人员不需要直接接触剧毒物品，降低了安全隐患。

技术领域

本发明属于免疫化学检测技术领域，涉及到免疫荧光检测方法，特别是牛乳中霉菌毒素及重金属快速量子点免疫荧光检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素是主要由黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢产物，是霉菌毒素中毒性最大且对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。黄曲霉毒素主要有B1、B2、G1、G2、M1和M2等几种。人或其它哺乳类动物食用被黄曲霉毒素B1污染的食物或饲料后，会将其代谢产生黄曲霉毒素M1。黄曲霉毒素M1有很强的致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡，所以对牛乳中霉菌毒素含量的检测至关重要。

目前常用的黄曲霉毒素M1检测方法有确证法和快速筛查法两类。确证法灵敏度高，可定量检测，但需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，检测时间长，样品前处理也较复杂，尤其是每次检测操作人员都要接触剧毒的标准品，所以无法用于基层或现场监控。快速筛查法成本低，使用方便快速，便于基层使用和现场使用，但其只能定性检测，无法定量。

目前环境中的重金属污染很严重，铅、汞、镉、铬等会损害人的神经系统和骨骼，还会引起高血压等疾病，所以对牛乳中重金属含量的检测也至关重要。目前常用的牛乳中重金属的检测方法主要是：样品经微波消解仪等方法消解后，用石墨炉原子吸收光谱法进行测定；但是原子吸收光谱仪价格昂贵，不利于推广。

发明内容

本发明为了克服现有技术的缺陷，设计了牛乳中霉菌毒素及重金属快速量子点免疫荧光检测方法，使用时简便易操作，操作时间短，检测结果读取快速，检测限低，精确度高，检测成本低，操作人员不需要直接接触剧毒物品，降低了安全隐患，可以推广应用。

本发明所采取的具体技术方案是：牛乳中霉菌毒素及重金属快速量子点免疫荧光检测方法，关键在于，所述的方法包括以下步骤：

A、牛乳的预处理：

将牛乳样品与稀释液均质混匀，进行离心处理，然后取上清液作为样品溶液，备用；

将牛乳样品进行消解，然后与螯合剂混合，形成的螯合物分离出来备用；

B、样品滴加：

选择与待测黄曲霉毒素类型相匹配的黄曲霉毒素检测卡条，将样品溶液滴加到黄曲霉毒素检测卡条上，黄曲霉毒素检测卡条上量子点标记的黄曲霉毒素抗体会与样品溶液中的黄曲霉毒素结合，所得结合物先与检测线处的黄曲霉毒素检测抗原结合，然后与控制线处的二抗结合，使量子点在黄曲霉毒素检测卡条的检测线和控制线处聚集；

选择与待测重金属类型相匹配的重金属检测卡条，将螯合物滴加到重金属检测卡条上，重金属检测卡条上量子点标记的螯合物的抗体会与螯合物结合，所得结合物先与检测线处的螯合物抗原结合，然后与控制线处的二抗结合，使量子点在重金属检测卡条的检测线和控制线处聚集；

C、测定：

利用荧光分析仪读取黄曲霉毒素检测卡条检测线、控制线处的荧光强度，分别记为T1、C1；

利用荧光分析仪读取重金属检测卡条检测线、控制线处的荧光强度，分别记为T2、C2；

D、结果计算：