[发明专利]一种大豆灰斑病离体叶片鉴定方法

权利要求书

1.一种大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)取待测品种大豆叶片预处理；

(2)将预处理后的大豆叶片置于保持叶片正常存活的环境下；

(3)用高压水枪对步骤(2)所得叶片进行蒸馏水喷打压力处理；

(4)用高压喷雾器将灰斑病原菌孢子悬浮液均匀喷洒到步骤(3)所得叶片表面进行接种；

(5)步骤(4)所得叶片培养14天后统计叶片发病情况，从而判定待测品种的抗病性。

2.根据权利要求1所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：步骤(1)所述大豆叶片预处理，具体为：选取同一位节生长势相近的新鲜大豆完全展开叶，将带柄三出复叶剪下后再将三出复叶的三片小叶分别剪下，用无菌水冲洗干净。

3.根据权利要求1所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：步骤(2)所述保持叶片正常存活的环境，制备方法为：在容器底部铺设纱布，纱布上铺设厚度为8.32-9.71mm且厚度均匀的脱脂棉层，脱脂棉层上铺设表层纱布，向容器内加入蒸馏水，浸润纱布及脱脂棉，加水量以达到纱布及脱脂棉的最大持水量为准。

4.根据权利要求3所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：步骤(1)预处理后的叶片，按品种号有序地将叶片正面朝上摆放在步骤(2)所述保持叶片正常存活的环境的表层纱布表面，叶柄与表层纱布紧密接触，叶片之间水平/垂直距离为5-7cm。

5.根据权利要求1所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：步骤(3)所述高压水枪处理，具体为：使高压水枪的出水方向垂直于叶片表面，边向叶片表面喷水边移动，移动方式为：对同一叶片，横向移动完成全部叶片表面的喷水处理后，再纵向移动完成全部叶片表面的喷水处理，最后以螺旋方式移动，完成全部叶片表面的喷水处理。

6.根据权利要求6所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：步骤(3)所述高压水枪处理，高压水枪额定排气压力为0.7 Mpa。

7.根据权利要求6所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：步骤(3)所述高压水枪处理，高压水枪枪头与叶片的距离为20-25cm。

8.根据权利要求1所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：所述灰斑病原菌孢子悬浮液孢子浓度为1×106个/mL。

9.根据权利要求3所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：步骤(4)所述高压喷雾器喷头与叶片表面垂直，喷头与步骤(2)所述保持叶片正常存活的环境中的容器底部的距离为5.5cm。

10.根据权利要求1所述的大豆灰斑病离体叶片鉴定方法，其特征在于：步骤(5)所述培养，培养温度为24-28℃，叶面湿润期为48h。