[发明专利]一种测量细菌趋化性的实验方法

说明书

本发明公开了一种测量细菌趋化性的实验方法，利用移液枪的枪头吸取含有引诱剂的琼脂，引诱剂经扩散后使感受到引诱剂的细菌进入枪头，再使用移液枪将枪头内的琼脂打出，通过测定琼脂中ATP浓度评定实验结果；操作简单方便，不存在安全风险，且实验材料容易获得，同时通过测定ATP的浓度来评定进入枪头内的细胞相对数目，与在显微镜下直接数数的方式相比，操作更简单方便，实验结果更准确。

技术领域

本发明涉及细菌趋向性实验技术领域，特别是涉及一种测量细菌趋化性的实验方法。

背景技术

趋化性(亦被称为化学趋向性)是趋向性的一种，是指身体细胞、细菌及其他单细胞、多细胞生物依据环境中某些化学物质而趋向的运动。趋向性对细菌等寻找能量来源物质(如葡萄糖)和致病能力等十分重要，细菌以此趋向有较高能量来源物质分子浓度的地方，或远离有毒(如苯酚)的地方。

目前，在实验室中测定细菌对不同引诱剂的趋化性能力时，多利用毛细玻璃管吸取含有引诱剂的琼脂，然后将毛细玻璃管放入细菌培养液中，并在一定时间后取出，再在显微镜下对进入毛细管的细胞进行计数，即可判定细菌的趋化性能力；这种方法存在如下问题：一是利用毛细玻璃管吸取引诱剂，毛细玻璃管内引诱剂不易取出，且观察时只能将毛细玻璃管打碎，以使进入毛细玻璃管的细菌完全释放出来，费时费力，浪费器材且存在一定安全风险；二是采用在显微镜下直接数数的方式来测定进入引诱剂内细菌数目，费时费力，且易存在误差。

因此如何使细菌趋化性的测量实验操作更简单且结果更准确，是本领域技术人员目前需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种测量细菌趋化性的实验方法，其利用移液枪的枪头吸取和打出含有引诱剂的琼脂，并通过测定ATP的浓度来评定进入枪头内的细胞相对数目，操作更简单方便，且实验结果更准确。

为解决上述技术问题，本发明提供一种测量细菌趋化性的实验方法，包括：

S1：将具有运动能力的细菌经过漂洗后重悬于第一离心管中；

S2：利用移液枪吸取含有预设浓度引诱剂的琼脂至其枪头内，将所述枪头插入所述第一离心管内，并使所述枪头的尖端浸没在细菌悬浮液中；

S3：静置预设时间后，从所述第一离心管内取出所述枪头；

S4：利用所述移液枪将所述枪头内的琼脂打出至第二离心管内；

S5：测算进入琼脂内的细胞相对数目，进而判定细菌对相应化学引诱剂的趋化性能力。

优选地，测算进入琼脂内的细胞相对数目具体包括：通过试剂盒测定琼脂中ATP的浓度，来测算进入所述枪头内的细胞相对数目。

优选地，将具有运动能力的细菌经过漂洗后重悬于第一离心管中具体包括：

将1mL培养到对数生长期的细菌利用PBS缓冲液离心漂洗两次；

利用含有0.3％甲基纤维素的100μLPSF缓冲液将细菌重悬于1.5mL的第一离心管中。

优选地，在利用移液枪吸取含有预设浓度引诱剂的琼脂至其枪头内之前还包括：

将枪头的尖端截去预设长度。

优选地，在将所述枪头插入所述第一离心管内后还包括：

在所述第一离心管的管口上盖上管盖。

优选地，在步骤S3与S4之间还包括：用酒精棉球擦掉所述枪头表面的细菌。

优选地，所述引诱剂包括Glc、Met、Ser、Pro和PC。

优选地，所述预设时间的范围为25-35min。