[发明专利]一种敲除大肠杆菌醛脱氢酶基因提高1,2,4-丁三醇产量的方法

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，是以E. coli KXW3009为出发菌株，敲除了大肠杆菌醛脱氢酶基因feaB、aldB或ydcW，所述feaB编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述aldB编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述ydcW编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.如权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述feaB的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述aldB的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述ydcW的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示。

3.一种生产1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，应用权利要求1-2任一所述的重组大肠杆菌进行发酵。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵条件为：

（1）挑取重组大肠杆菌单菌落接种到液体LB培养基，35-39℃、200-220 rpm培养10-20h，获得种子液；

（2）以体积比1-5%的接种量将步骤（1）的种子液接种到新的液体LB培养基中，35-39℃、200-220 rpm，摇瓶培养8-14 h，获得发酵液；

（3）以体积比10-15%的接种量将步骤（2）的发酵液接种到装液量为30-50%的发酵罐中，发酵温度35-39℃，转速400-450 rpm，通气量1.5-2 vvm，pH=6.0-7.0，培养50-80 h。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述方法用于医药或化工领域。

6.权利要求1-2任一所述的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，在E. coliKXW3009中利用CRISPR-Cas9系统敲除了大肠杆菌醛脱氢酶基因feaB、aldB或ydcW。

7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.以pTargetF质粒的基因为模板，设计sgRNA引物，以大肠杆菌醛脱氢酶基因序列为模板，设计引物，利用融合PCR将片段融合；

B.用电转法将融合片段转入大肠杆菌中，并筛选出阳性菌；

C.消除pTargetF质粒，得到大肠杆菌醛脱氢酶基因缺失的重组大肠杆菌。

8.权利要求1-2任一所述的重组大肠杆菌在制备1,2,4-丁三醇中的应用。