[发明专利]展示猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的霍乱弧菌菌影构建及制备

权利要求书

1.一种展示猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的霍乱弧菌菌影，其特征在于，制备方法包括如下步骤：

（1）构建tcpP-E2蛋白融合蛋白表达载体pJSL13；

（2）制备霍乱弧菌ΔtcpP缺失株感受态细胞；

（3）将pJSL13及温控诱导裂解质粒pBV220-E共同转入霍乱弧菌ΔtcpP缺失株感受态细胞，得到E2-rVC；

（4）诱导E2-rVC表达融合蛋白tcpP-E2并制备菌影E2-rVCG；

所述步骤（1）具体为：

1）以霍乱弧菌基因组为模板扩增tcpP基因上游片段，以人工合成的E2蛋白ABCD四区基因为模板扩增下游片段，上下游片段进行纯化，将纯化好的上下游片段通过OverlappingPCR拼接为一条片段tcpP-E2；

2）将融合表达基因tcpP-E2片段与载体pacyc-aphB用EcoRI，PstI内切酶进行酶切；

3）酶切过后的基因片段与载体片段进行酶连，酶连产物纯化后电转化至大肠杆菌DH5αλpir中，得到pJSL8；

4）以pBAD24-tcpH质粒为模板，扩增Pbad-tcpH基因片段，将Pbad-tcpH片段与pJSL8质粒分别进行PstI单酶切，将酶切片段与酶切载体酶连，酶连产物纯化后电转化至大肠杆菌DH5αλpir中，得到pJSL13。

2.根据权利要求1所述的一种展示猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的霍乱弧菌菌影，其特征在于：所述步骤（3）中反应温度为30℃。

3.根据权利要求1所述的一种展示猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的霍乱弧菌菌影，其特征在于：所述步骤（4）中诱导的反应条件：OD₆₀₀ =0.3时，30℃，200 rpm下加入0.1% Ara诱导tcpP-E2重组蛋白表达；OD₆₀₀=0.7时，42℃，60 rpm下诱导裂解E蛋白表达。

4.根据权利要求1或3所述的一种展示猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的霍乱弧菌菌影，其特征在于：所述霍乱弧菌为O1血清型霍乱弧菌C6706。