[发明专利]一种NK细胞评估模型及NK细胞杀伤肿瘤细胞毒力的评价方法

说明书

本发明公开了一个提高NK细胞杀伤肿瘤细胞毒力的方法。在体外模拟肿瘤缺氧条件下，(1)NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力下降，与此同时，NK细胞毒力相关分子GranzymeB，IFN‑γ，脱颗粒标志物CD107a以及细胞表面杀伤活性受体NKp30，NKp46和NKG2D的表达被显著降低。(2)同时，缺氧所引起的NK细胞毒力降低还与ERK和STAT3这两个NK细胞毒力相关信号通路的活化受到削弱有关，其磷酸化水平被缺氧降低。(3)在NK细胞中，缺氧所降低的ERK和STAT3磷酸化与活化与SHP‑1的表达有关：缺氧会升高SHP‑1表达，而用小分子化合物TPI‑1抑制SHP‑1或利用基因敲低SHP‑1基因表达后，均成功地逆转了缺氧所导致的NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的降低。

技术领域

本发明属于杀伤肿瘤细胞技术领域，特别涉及一种NK细胞评估模型及NK细胞杀伤肿瘤细胞毒力的评价方法。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell,NK cell)是一类天然免疫效应细胞，不同于获得性免疫细胞，NK细胞具有直接杀伤恶变肿瘤细胞、被病毒感染细胞的能力。NK细胞主要通过其表面固有表达的活化性和抑制性两类受体的动态平衡来调控其杀伤毒力。NK细胞活化性受体包括NKp30、NKp46和NKG2D等，它们能够通过识别并结合肿瘤细胞表面相应的配体，从而发挥杀伤肿瘤细胞的效应。抑制性受体可以识别许多正常细胞表面主要组织相容性复合体I(major histocompatibility complex class I,MHC I)，从而降低NK细胞的反应活性。当NK细胞与肿瘤细胞形成免疫突触时,便会分泌穿孔素和颗粒酶介导靶细胞的凋亡。除此之外，活化的NK细胞也可以产生多种促炎症因子和趋化因子间接促成靶细胞死亡。

鉴于NK细胞在机体中重要的免疫监视作用，天然识别并杀伤肿瘤的能力，近年来NK细胞免疫肿瘤治疗越来越受到重视。目前，NK细胞治疗已在多种肿瘤中开展临床研究，受试患者的完全缓解率和无病生存期都得以延长。然而，虽然NK细胞具有泛特异性识别肿瘤细胞的特点，但很多证据也表明，肿瘤细胞能够依靠多种机制逃逸免疫系统的监视。其中，肿瘤微环境被认为是重要的机制之一。就肿瘤微环境而言，其包括细胞、细胞外基质、细胞因子以及一些无定型成分以及物理因素等。其中，肿瘤缺氧(hypoxia)被认为是一种极其重要的微环境因素。肿瘤组织因为生长迅速、血管生长于发生异常等原因导致氧气供应不足。肿瘤缺氧会导致肿瘤细胞对耐受放化疗，是造成复发的重要因素。缺氧是实体肿瘤瘤中普遍而重要的特征。近年来研究也发现，缺氧还是急性髓系白血病和多发性骨髓瘤骨髓等血液系肿瘤微环境中的一个普遍特点。缺氧微环境能够诱导肿瘤细胞中与増殖、分化、凋亡、能量代谢、血管形成、侵袭转移及放化疗耐受等相关癌基因表达，来维持肿瘤细胞生长和转移等恶性表型。此外，缺氧的肿瘤微环境也不利于免疫细胞发挥免疫监视作用，在肿瘤内发挥免疫抑制，帮助肿瘤细胞逃避免疫攻击以及抑制免疫杀伤功能，但相关机制并不清楚。围绕肿瘤微环境，尤其是肿瘤组织缺氧缺氧对于NK细胞的影响，缺少相关研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种NK细胞评估模型及NK细胞杀伤肿瘤细胞毒力的评价方法，以解决上述问题。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种NK细胞评估模型，使用两种NK细胞系KHYG-1和NK92为对象，以体外培养条件下KHYG-1和NK92对肿瘤细胞的杀伤为模型；

以特定浓度氧气培养下的NK细胞KHYG-1和NK92对肿瘤细胞的杀伤作为评价缺氧对于NK细胞影响的评估模型。

进一步的，特定浓度氧气为：20％氧气浓度代表正常条件；1％氧气浓度模拟肿瘤缺氧。

进一步的，一种NK细胞杀伤肿瘤细胞毒力的评价方法，包括以下步骤：