[发明专利]一种调控机械损伤胁迫的内含子及其应用

说明书

本发明涉及一种本发明属于植物基因工程领域，涉及到一种拟南芥EIJ1基因的第一个内含子及其应用。拟南芥EIJ1基因内含子的序列如SEQ ID NO.3所示。本次发明首次从拟南芥中克隆到一种拟南芥EIJ1第一个内含子，并验证了该内含子在EIJ1基因的表达调控上发挥重要作用，可用于调控植物的机械损伤胁迫，还可应用于培育抗逆植物新品种。

技术领域

本发明属于植物基因工程领域，涉及到一种拟南芥基因EIJ1第一个内含子及其应用。

背景技术

植物在发育过程中会受到病、虫害等生物胁迫的影响。很多植物病害是由于植物伤口损伤进行传染的，并且害虫侵食植物不可避免的造成机械损伤，因此研究机械损伤胁迫对防治植物病虫害具有潜在并重要的意义。

随着生物科技的发展，人们对植物逆境胁迫机理的研究也不断深入，大量生物胁迫相关基因被鉴定和研究。但由于植物机械损伤胁迫下的生理生化变化的复杂性，已鉴定功能基因较为有限，相关的表达调控分子机制仍需进一步探讨。

验证植物机械损伤基因，探索植物抗性作用机制，对最终培育优异抗虫品种和促进农业的可持续发展具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种响应机械损伤胁迫的拟南芥EIJ1的基因的第一个内含子，该内含子是调控植物抗机械损伤胁迫的主要因子。

本发明的目的是通过如下技术方案实现：

拟南芥EIJ1的基因的第一个内含子，其DNA序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明的另一目的提供的改造后EIJ1基因组序列，该序列可用于研究植物机械损伤胁迫。

改造后EIJ1基因组序列，如SEQ ID NO.5所示，即在SEQ ID NO.1提供的EIJ1基因组序列上去除掉SEQ ID NO.3所示的第一个内含子后的所示序列。

本发明的另一目的是提供一种EIJ1基因的启动子序列，该序列可用于研究植物机械损伤胁迫。

EIJ1基因的启动子DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

扩增EIJ1所具有的启动子DNA序列正向引物序列如SEQ ID NO:6所示，反向引物序列如SEQ ID NO:8所示。

为了实现上述发明目的，本发明还提供带有Gus报告基因的重组表达载体。所述载体是将SEQ ID NO.1所示的拟南芥EIJ1所具有的基因组DNA序列用重组交换技术插入植物表达载体HY107得到的植物表达载体pEIJ1:EIJ1-Gus；或将SEQ ID NO.2所示的拟南芥EIJ1所具有的启动子DNA序列用重组交换技术插入植物表达载体HY107得到的植物表达载体pEIJ1:Gus；或将SEQ ID NO.5所示的拟南芥EIJ1所具有的基因组DNA但去除掉第一个内含子的后的DNA序列用重组交换技术插入植物表达载体HY107得到的植物表达载体pEIJ1:EIJ1^D-Gus(Delete第一个内含子)。

使用HY107构建植物表达载体时，为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的选择性标记基因(BASTA基因、萤光素激酶基因等)或抗生素标记物(卡那霉素标记物、潮霉素标记物等)的抗性基因。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

本发明的另一目的还提供了一种生物工程菌，其是将含有所述重组过表达载体转入根癌农杆菌GV3101而得。

本发明的另一目的是提供上述拟南芥EIJ1基因的第一个内含子的应用。上述拟南芥EIJ1基因的第一个内含子在调控植物机械损伤胁迫中的应用。上述拟南芥EIJ1基因的第一个内含子还可应用于培育抗逆植物新品种。