[发明专利]一种与肺癌相关的甲基化基因及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种与肺癌相关的甲基化基因，包括基因HOXA7、HOXA9、SCT及SHOX2中的一个或多个，其核苷酸序列依次如序列表中序列1、序列2、序列3及序列4所示；其特征在于，所述基因HOXA7、HOXA9、SCT及SHOX2的甲基化胞嘧啶位点依次标定在所述序列1、序列2、序列3及序列4中。

2.一种如权利要求1所述基因的检测试剂盒，用于检测待测样本中的甲基化基因，包括以下试剂中的一种或多种：

检测HOXA7基因的试剂，含编号1-1、1-2序列所示的引物以及编号1-3序列所示的探针；

检测HOXA9基因的试剂，含编号2-1、2-2序列所示的引物以及编号2-3序列所示的探针；

检测SCT基因的试剂，含编号3-1、3-2序列所示的引物以及编号3-3序列所示的探针；含编号3-4、3-5序列所示的引物以及编号3-6序列所示的探针；

检测SHOX2基因的试剂，含编号4-1、4-2序列所示的引物以及编号4-3序列所示的探针。

3.按照权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括用于内参基因检测的ACTB引物和探针。

4.按照权利要求3所述的检测试剂盒，所述待测样本包含人体血液、肺泡灌洗液、肺泡冲洗液、痰液及肺部组织样本中的一种或多种，其特征在于，该待测样本还包含支气管刷检样本。

5.按照权利要求3或4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述HOXA7、HOXA9、SCT以及SHOX2基因相应的引物组分别由各自试剂中含有的引物及探针组成，在PCR反应液里各成分浓度依次为：0.2μM基因相应的引物组，0.6μM ACTB引物和探针，3.5mM MgCl₂、0.25mMdNTP；此外，还含有用量为100U的DNA聚合酶，用于阳性对照的非小细胞HCC827细胞系计数后提取的DNA，以及用于阴性对照的灭菌水。

6.按照权利要求2、3及4任一项所述的试剂盒，其特征在于，将所述试剂中的任意两个进行组合，或将所述试剂中的任意三个进行组合，或将四个所述试剂进行组合，分别构成组合试剂盒。

7.按照权利要求6所述的组合试剂盒，其特征在于，所述HOXA7、HOXA9、SCT以及SHOX2基因相应的引物组分别由各自的检测试剂中含有的引物及探针组成，在PCR反应液里各成分浓度依次为：组合中的基因相应的引物组均设为0.2μM，0.6μM ACTB引物和探针，3.5mMMgCl₂、0.25mM dNTP；此外，还含有用量为100U的DNA聚合酶，用于阳性对照的非小细胞HCC827细胞系计数后提取的DNA，以及用于阴性对照的灭菌水。

8.一种获取如权利要求1所述基因的方法，包括：

对待测样本进行全基因组甲基化阵列分析，筛选出的与良恶性肺结节鉴别或肺癌相关的159种候选基因；

从所述候选基因中选出靶标基因HOXA7、HOXA9、SCT、SHOX2，分别针对所述靶标基因的甲基化DNA特异性片段设计相应的引物和探针，所述引物和探针分别等同于、互补于或杂交于序列表序列1-4中至少15个连续核苷酸或其互补序列，获取并验证符合检测要求的靶标基因的性能指标。

9.按照权利要求8所述的方法，其特征在于，所述靶标基因的性能指标包括：敏感度、特异性及接受者操作特征曲线下面积AUC值。

10.按照权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述待测样本包含人体血液、肺泡灌洗液、肺泡冲洗液、痰液、肺部组织及支气管刷检样本中的一种或多种。