[发明专利]一种诊断膀胱癌试剂盒

说明书

本发明公开了一种诊断膀胱癌试剂盒，该试剂盒包括：BUB1抗体、二甲苯、乙醇、3％H₂O₂溶液、1％BSA封闭液、DAB显色试剂、苏木素、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG、0.01M的pH＝6.0柠檬酸盐缓冲液和0.01M PBS。本发明依据前期研究的临床数据和基础生物实验数据中BUB1与膀胱癌之间的强相关性。基于BUB1蛋白的表达量与膀胱癌的这种相关性，以该蛋白作为分子标记对其表达量进行检测可以帮助诊断膀胱癌。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种诊断膀胱癌试剂盒。

背景技术

世界范围内膀胱尿路上皮癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤，美国每年新增病例约76960例，死亡16390例。根据2017年临床肿瘤杂志发表的最新统计数据显示，膀胱癌发病率已位居美国男性最常见恶性肿瘤第4位^[1]。在我国其发病率及病死率均列泌尿生殖系统肿瘤的首位。2015年全国新确诊为膀胱癌的患者人数超过8万，导致的死亡人数超过3万，约70％以上首诊时是浅表性癌，30％肿瘤为侵袭性膀胱癌^[2,3,4]。另外，大约60％浅表性膀胱癌会复发，且20-30％会进展为肌层浸润肿瘤^[5]。当肿瘤侵袭，长期存活率显著降低。局限性肿瘤的5年总生存率为71％而转移癌的5年生存率仅5％^[6]。目前临床上缺乏膀胱癌的早期诊断标志物，而膀胱镜检又会给患者带来痛苦。因而发现新的膀胱癌的标志物尤为重要。

BUB1被看做原癌基因是纺锤体检查点系统的一个重要组成部分，它参与检测纺锤体形成过程中微管与染色体动粒的结合。细胞在长期的进化过程中产生的监控纺锤体形态、染色体着丝点与微管联接及其产生的张力、染色体排列、确保姐妹染色单体精确分离的质控机制，即纺锤体检查点，又称有丝分裂检查点^[7]。蛋白激酶Bub1作为纺锤体检查点的平台蛋白,可能是纺锤体检查点其他组分定位于纺锤体检查点的基础。

关于BUB1与膀胱癌的关系及其机制的研究还鲜有报道，本发明通过临床数据和基础生物实验数据来研究BUB1与膀胱癌之间的关系，本发明的成果可以为临床诊断膀胱癌提供新的方法。

发明内容

本发明目的是提供一种用于人的BUB1蛋白进行膀胱癌检测和分型的试剂盒。

本发明的技术方案概述如下：

本发明首次发现BUB1蛋白的表达量与膀胱癌具有一定的相关性，利用这种BUB1蛋白的表达量与膀胱癌的相关性，可以将特异性抗BUB1蛋白的抗体即BUB1抗体用于制备诊断膀胱癌的试剂盒。

一种诊断膀胱癌试剂盒，包括：BUB1抗体、二甲苯、乙醇、3％H₂O₂溶液、1％BSA封闭液、DAB显色试剂、苏木素、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG、0.01M的pH＝6.0柠檬酸盐缓冲液和0.01M PBS。

本发明的优点和有益效果：

利用本发明的试剂盒，依据前期研究的临床数据和基础生物实验数据中BUB1与膀胱癌之间的强相关性。基于BUB1蛋白的表达量与膀胱癌的这种相关性，以该蛋白作为分子标记对其表达量进行检测可以用于快速指导诊断膀胱癌病人的判断。

附图说明

图1是敲减BUB1蛋白能够有效抑制膀胱癌T24细胞(A)和5637(B)的生长。

图2是敲减BUB1蛋白能够抑制膀胱癌T24细胞(A)和5637(B)的侵袭。

图3是蛋白免疫印记实验分析siRNA敲减BUB1蛋白的表达。其中(A为T24细胞)、(B为5637细胞)。

图4膀胱癌病例免疫组化评分+，无转移生长，免疫组化评分++有远处转移。其中图A,B为正常膀胱组织，C为低级别膀胱癌组织，D为高级别膀胱癌组织。