[发明专利]一种通过敲除鞭毛和菌毛基因高效合成PHB的方法

权利要求书

1.一种生产聚3-羟基丁酸酯的重组菌，其特征在于，敲除大肠杆菌基因组上三个鞭毛基因簇或菌毛基因簇，并将β-酮基硫解酶，乙酰辅酶A还原酶和PHB合成酶的编码基因转化到菌株中；所述三个鞭毛基因簇为flhE-motA，fliY-fliR和flgN-flgL；所述菌毛基因簇为fimB-fimH；

所述鞭毛基因簇flhE-motA包含flhE、flhA、flhB、cheZ、cheY、cheB、cheR、tap、tar、cheW、cheA，motB，motA，共13个基因；所述鞭毛基因簇fliY-fliR包含fliY，fliZ，fliA、fliC、fliD、fliS、fliT、amyA、yedD、yedE、yedF、yedL，yedN，yedM，intG、fliE、fliF、fliG、fliH、fliI、fliJ、fliK、fliL、fliM、fliN、fliO、fliP、fliQ、fliR共30个基因；所述鞭毛基因簇flgN-flgL包含flgN、flgM、flgA、flgB、flgC、flgD、flgE、flgF、flgG、flgH、flgI、flgJ、flgK、flgL共14个基因；所述菌毛基因簇fimB-fimH包含fimB、fimE、fimA、fimI、fimC、fimD、fimF、fimG、fimH共9个基因；

所述β-酮基硫解酶的protein ID为QBK40993.1；所述乙酰辅酶A还原酶的proteinID为QBK40994.1；所述PHB合成酶的proteinID为QBK40992.1。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌W3110。

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述转化是将含有β-酮基硫解酶、乙酰辅酶A还原酶和PHB合成酶的编码基因的PHB合成基因簇phaCAB连接到表达质粒上后，转化到宿主大肠杆菌中。

4.一种生产PHB的方法，其特征在于，所述方法是应用权利要求1～3任一所述的重组菌进行发酵生产。

5.根据权利要求4所述的方法，所述发酵生产是将所述的重组菌接种到发酵培养基中，以葡萄糖为底物，进行发酵生产。

6.根据权利要求5所述的方法，所述发酵培养基的组成包括：20g/L葡萄糖，17.1g/LNa₂HPO₄·12H₂O，3g/LKH₂PO₄，0.5g/LNaCl，添加1mMMgSO₄，0.1mM CaCl₂，10mg/mL维生素B1。

7.权利要求1～3任一所述重组菌在生产PHB中的应用。