[发明专利]一种基于PCR技术进行环颈雉早期性别鉴定的方法

说明书

本发明公开了一种基于PCR技术进行环颈雉早期性别鉴定的方法，属于生物监测鉴定技术领域。本发明的PCR鉴定用的两对PCR引物，包括一对CHD1基因片段引物和一对内参基因段引物。PCR鉴定方法为：以待测环颈雉雏鸡的血样基因组DNA为模板，采用环颈雉性别鉴定用PCR引物进行PCR扩增，然后采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，当扩增产物只出现590bp的特异性扩增条带时判定为公环颈雉，当扩增产物出现590bp的特异性扩增条带和442bp的特异性扩增条带时判定为母环颈雉。该方法具有操作简单方便，能够在出雏时进行性别鉴别、鉴别快速、结果准确等优点，避免了采用传统方法耗时长、饲养成本高、易出错等缺点。

技术领域

本发明属于生物检测鉴定技术领域，尤其是涉及一种基于PCR技术进行环颈雉早期性别鉴定的方法。

背景技术

环颈雉(美国七彩山鸡)是一种肉蛋兼用型品种，具有体型丰满、产蛋多、体重较大、肉质优、抗病力强、一致性好、遗传稳定等特点，属于特种经济禽类，具有极高的食用价值和观赏、狩猎功效。蛋用环颈雉的养殖也具有较好的市场前景。由于环颈雉出雏时不能区分公母，需要等环颈雉长到足够日龄才能通过体型外貌区分公母，这在很大程度上增加了环颈雉育种企业的养殖成本。随着我国环颈雉养殖业的发展，快速、及时、准确的鉴别出雏环颈雉的性别，成为一个亟待解决的问题。

近年来，分子生物技术的发展，为这一难题的解决提供了另一种思路。鸟类的性别是由染色体决定的，其性别决定方式为ZW型，雄鸟有一对Z染色体，而雌鸟则是一个Z染色体和一个W染色体。CHD1基因在Z染色体和W染色体上的序列具有一定差异，可以利用该基因在Z染色体和W染色体上的差异鉴别绝大多数的禽类，具有很大的通用性。

自1995年开始，CHD1基因被广泛应用于鸟类性别的分子鉴定，CHD1基因已经成为鸟类性别鉴定最重要的分子标记。由于不论雌鸟还是雄鸟都会有CHD1-Z基因，因此是否检测到CHD1-Z扩增产物可以作为扩增反应是否正常进行的参照，避免了将实验失败的结果误判为雄性；而CHD1-W基因是雌性专有的，只有雌性才可能检测到CHD1-W扩增。这种方法的优点是成本较低，在现有鉴定条件下被广泛地采用。然而不同种属的鸟类，其CHD1基因序列并不完全一致，因此不存在通用的引物对。

发明内容

本发明的目的在于根据环颈雉公母性染色体的特征，提供一种基于PCR技术进行环颈雉早期性别鉴定的方法，从而实现出雏时鉴别环颈雉性别的目的。本发明的方法能够在环颈雉出雏后快速、准确进行环颈雉性别鉴定。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种基于PCR技术进行环颈雉早期性别鉴定的方法，使用CHD1基因片段引物，以环颈雉血液基因组DNA为模板进行PCR扩增，对PCR产物进行检测，当扩增产物只出现590bp的特异性扩增条带时判定为公环颈雉，当扩增产物出现590bp的特异性扩增条带和442bp的特异性扩增条带时判定为母环颈雉。

根据环颈雉Z和W染色体序列的特征，筛选出在W和Z染色体上具有不同长度的CHD1基因片段CHD1-Z和CHD1-W，针对CHD1-Z和CHD1-W基因片段设计出CHD1基因片段引物。

CHD1基因片段引物的特点是母环颈雉可以扩增出两个条带，分别是442bp和590bp，而在公环颈雉上只能扩增出一个条带，为590bp。

CHD1基因片段引物核苷酸序列具体如下所示：

上游引物：5'-TACTGATTCGTCTACGAGA-3'，如SEQ ID No.1所示；

下游引物：5'-ATTGAAATGATCCAGTGCTTG-3'，如SEQ ID No.2所示。

在进行PCR扩增时设计了一对内参基因引物作为对照。