[发明专利]一种RAA-LFD检测鸡传染性喉气管炎病毒的引物和探针组合及其应用

权利要求书

1.一种RAA-LFD检测鸡传染性喉气管炎病毒的引物和探针组合，其特征在于：所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物序列如SEQ ID No.2所示；所述探针序列如SEQ ID No.11所示。

2.如权利要求1所述的引物和探针组合，其特征在于：所述下游引物标记有生物素；所述探针的5′端修饰有荧光基团，距离5′端31bp位置有一个碱基缺口，缺口用四氢呋喃残基修饰，3′端阻断修饰。

3.如权利要求2所述的引物和探针组合，其特征在于：所述荧光基团为6-羧基荧光素或异硫氰酸荧光素。

4.权利要求1至3任一项所述的引物和探针组合在非诊断性检测鸡传染性喉气管炎病毒中的应用。

5.包含权利要求1至3任一项中所述引物和探针组合的检测鸡传染性喉气管炎病毒的试剂盒。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：还包括RT-RAA核酸扩增试剂盒、病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒以及侧流层析试纸条。

7.利用权利要求1至3任一项所述的引物和探针组合检测鸡传染性喉气管炎病毒的方法，其特征在于，至少包括如下步骤：

(1)提取鸡传染性喉气管炎病毒基因组DNA；

(2)以所述DNA为模板，利用所述引物和探针组合进行RAA扩增；

(3)采用LFD对RAA扩增产物进行检测。

8.如权利要求7所述的检测鸡传染性喉气管炎病毒的方法，其特征在于，所述RAA扩增反应体系为：基础缓冲液25μL、上游引物和下游引物各2.1μL、探针0.6μL、DNA模板1μL、纯化水16.7μL以及乙酸镁2.5μL，DNA模板浓度为200-240ug/μL，引物和探针浓度为1200-1500nmol/L。

9.如权利要求8所述的检测鸡传染性喉气管炎病毒的方法，其特征在于：所述RAA扩增反应温度为35-40℃，时间为15-20min。

10.如权利要求7所述的检测鸡传染性喉气管炎病毒的方法，其特征在于：步骤(3)中，LFD出现两条红带为阳性，一条位于质控区，一条位于检测区，阳性结果表明扩增产物中含有待检测核酸片段；LFD的质控区出现一条红带，检测区没有红带，表示为阴性，阴性结果表明扩增产物中不含有检测片段。