[发明专利]靶向调节miRNA的功能性小肽、其获得方法及其应用

说明书

本发明涉及靶向调节miRNA的功能性小肽、其获得方法及其应用。本发明提供了来源于pre‑miRNA的功能性小肽，称为普瑞肽(Pretide)。所述Pretide肽可特异性调节相应的miRNA或pre‑miRNA的表达，且具有毒性小、效应持久、作用稳定、易于合成等优势。本发明还公开了基于所述Pretide的作用机理、以所述Pretide为靶点的调控细胞内miRNA或pre‑miRNA表达或含量的方法及试剂。本发明的技术方案在药物开发方面具有极大的发展前景。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，更具体地，本发明涉及靶向调节miRNA的功能性小肽、其获得方法及其应用。

背景技术

miRNA是一类长度约为21nt的内源性小型非编码单链RNA。miRNA基因在细胞核内转录产生初级转录产物(pri-miRNA)，Dorsha酶将其剪切成为70到90个碱基的茎环结构miRNA前体(pre-miRNA)之后由Exportin 5转运至胞浆，再经Dicer酶切割形成miRNA成熟体，作为翻译前调控因子特异性抑制靶向基因表达，miRNA加工成熟与小肽假说如图1a。

miRNA能够影响超过50％的人类基因功能，参与细胞分化，增殖，凋亡等生命活动的方方面面。同时其表达水平也与人类疾病密切相关，如传染病，癌症与自身免疫性疾病等。本发明人在前期研究中通过分析SLE患者外周血中miRNA的表达谱，鉴定了多个在SLE病人外周血中异常表达的miRNA基因，提示它们可能参与了SLE的免疫紊乱。经过对其中一些miRNA的功能的探索，本发明人发现了多个miRNA从不同方面参与了SLE的病理过程，例如：miR-146a在SLE患者外周血中低表达，而miR-146a既能抑制TLR信号通路的激活抑制IFN的产生，又能抑制IFN信号通路的传递；miR-21在SLE患者的T细胞中低表达，从而促进了IL2的过度表达等。这提示，寻找miRNA的调控分子能够为其相关疾病的治疗提供新方向。

目前广泛应用于调控miRNA的分子主要有合成的miRNA mimic和miRNAinhibitor，分别通过模拟细胞中成熟miRNA的高水平表达或是与成熟miRNA序列竞争性结合，对miRNA功能进行增强或是抑制。但直接应用核酸药物进行治疗，由于其代谢快，给药剂量大，给药方式的局限以及自身的不稳定等缺点，开发成药物具有一定难度。

此外，也有更多研究开始关注利用化学合成的小分子对miRNA进行调控，这主要是因为：1)化学合成的小分子体积小，细胞膜穿透性强；2)稳定性高，不容易被细胞内的酶降解；3)可大规模合成，成本比核酸合成低；4)容易修饰和优化；5)可发展成探针研究细胞内的信号通路；6)可作为疾病治疗的先导化合物。Arenz等首次提出利用小分子对miRNA进行调控，并提出了一种基于Dicer酶的活性检测来筛选小分子调控剂的方法。后来，基于细胞内的荧光底物的筛选体系也被报道能更有效地筛选出具有特异性或非特异性的小分子调控剂，例如Jin等从多种批准的化合物和天然产物中发现Enoxacin可作为miRNA广谱激活剂，而Jeang等报道了两个广谱抑制剂，分别能通过干扰Dicer的切割功能和miRNA与AGO2结合能力从而广谱性降低其成熟过程。同时，Maiti等也发现肺结核药物链霉素可特异性抑制miR-21成熟。但这种通过在小分子化合物库利用激酶筛选获得候选的分子，结合后续小鼠体内药效动力学研究与临床试验进行药物发现的方法，往往要耗费数十年时间以及巨额的研发投入。小分子化合物的毒性与前期筛选效率、临床实验的代价与风险以及新型结构化合物开发的越来越困难都成为miRNA的小分子调控剂研发的限速步骤。

综上，尽管已知miRNA参与了诸如生长发育、分化、代谢等诸多生理过程；许多人类疾病中都存在着miRNA的异常表达或是功能失调，但目前对于miRNA的调控分子仍知之甚少。本领域亟待找到一些调控miRNA或其上下游分子的方法和试剂，以期改善目前状况。

发明内容

本发明的目的在于提供靶向调节miRNA的功能性小肽、其获得方法及其应用。