[发明专利]一种防治鼻咽癌的亚单位纳米疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种防治鼻咽癌的亚单位纳米疫苗及其制备方法。具体公开了一种纳米颗粒，其包含EBNA1△GA蛋白、免疫佐剂、泊洛沙姆和多酚物质，所述EBNA1△GA蛋白为删除了EBNA1蛋白中的甘氨酸‑丙氨酸重复序列得到的重组蛋白。本发明还公开了制备所述纳米颗粒的方法；本发明制备得到的纳米颗粒形态规则、外形圆整、表面光滑、分散性好，无明显粘连、破损、坍塌等现象；纳米颗粒中EBNA1△GA蛋白和免疫佐剂具有较高的包封率；所述纳米颗粒施用于动物后，能产生较强的体液免疫，使细胞免疫明显增强，在小鼠皮下肿瘤模型的预防和治疗效果优于游离形式的抗原/佐剂混合注射以及现有的含铝佐剂的疫苗，具有较大的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，更具体地，涉及一种防治鼻咽癌的亚单位纳米疫苗，其包含EBV核抗原EBNA1蛋白、免疫佐剂、药用辅料聚合物和多酚类，所述免疫佐剂选自CpG或IFN-α。本发明还涉及鼠源化的稳定表达特异性抗原鼻咽癌细胞的构建方法，制备所述纳米疫苗的方法，所述纳米疫苗用于预防或治疗在小鼠体小鼠模型对纳米疫苗的免疫应答。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)属于人类γ疱疹病毒，它在人类广泛传播，大约95％的成人终生携带EBV。EB病毒的隐性感染与人类多种恶性肿瘤密切相关，如非洲儿童Burkitt's淋巴瘤(BL)、鼻咽癌(NPC)、何杰金氏病(HD) 以及各种免疫抑制病人和移植病人的淋巴细胞增生紊乱引起的淋巴瘤(PTLD) 等。其中鼻咽癌是一种在我国广东及东南亚地区常见的恶性肿瘤，鼻咽癌患者临床主要表现为鼻塞、涕中带血、听力下降、耳闷、复视及头痛等。临床主要治疗方法有传统的放射治疗，化学药物治疗，化学药物和放射联合治疗，手术治疗，以干扰素为主的免疫治疗。EBV侵染人体主要分为两个时期：1、溶解性感染期； 2、潜伏感染期。其中溶解感染期主要表达早期抗原(EA)，衣壳抗原(VCA)，膜抗原(MA)。潜伏感染期主要表达核抗原、潜伏膜抗原，其中核抗原主要有 EBNA1，EBNA2，EBNA-LP，EBNA-3A，EBNA-3B，EBNA-3C。潜伏膜抗原主要有LMP-1，LMP-2A，LMP-2B。临床检测发现EBV初次感染病人体内VCA IgG滴度在4个月内逐渐升高并后期趋于平稳并持续表达，另外EBNA1 IgG会在60天开始出现并于6个月后出现持续平稳表达。

自然情况下肿瘤的发生及相关免疫主要是通过肿瘤抗原释放后被抗原递呈细胞(antigen-presenting cells，APCs)呈递给T细胞并激活T细胞，激活的T 细胞继而通过迁移、浸润到肿瘤部位进行特异性杀伤肿瘤细胞。但自然过程中肿瘤的爆发式生长及免疫系统激活的效率低，而通过纳米递送系统有效地，同时递送抗原和佐剂将会大大提高特异性免疫，增强对肿瘤细胞的杀伤效率。

传统的灭活或者减活疫苗的安全以及其引起的全身性免疫风暴在很多疫苗体系中无法避免。但随着现代分子生物学及生物化学的发展，亚单位蛋白疫苗及多肽疫苗的优势及应用得到广泛肯定。利用纳米疫苗的尺寸优势以及淋巴靶向的特点，共递送抗原及佐剂将会更有效的激活T细胞和B细胞，增强免疫效果。

EBV在宿主细胞进入潜伏感染后将会持续表达EB病毒核抗原1(EBNA1， Epstein-Barr Nuclear Antigen 1)，针对EBNA1的抗肿瘤疫苗是当前研究领域的热点，专利CN201310676489.X、CN201310588797.7和CN201410817936.3等均公开了包含EB病毒EBNA1蛋白的疫苗，但是，天然EBNA1蛋白其免疫原性较弱，单独使用往往不能引起有效的免疫效果，而且EBNA1中的甘氨酸-丙氨酸 (GA)重复序列会抑制抗原的泛素化过程，从而抑制抗原的呈递。因此，设计针对EBNA1蛋白新抗原表位，且能够同时引起体液免疫和细胞免疫的新型EBV 纳米疫苗势在必行。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种纳米颗粒。

本发明的另一目的在于提供所述纳米颗粒的制备方法。

本发明的再一目的在于提供所述的纳米颗粒的应用。