[发明专利]可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用

权利要求书

1.一种可曝光预染蛋白marker的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、根据预染发光蛋白marker中各蛋白条带分子量大小设计对应的核酸片段，并确定与之对应的表达载体；

S2、预备所述表达载体，并通过PCR扩增获得所述基因片段；将核酸片段连接到与之对应的表达载体上，并转入宿主细胞内进行表达、纯化，以得到与条带对应的不同分子量大小的发光蛋白；

S3、将不同分子量大小的发光蛋白分别与染料混合，以获得不同分子量的预染蛋白；

S4、将不同分子量大小的预染蛋白按预设比例混合，得到可曝光预染蛋白marker。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述蛋白条带的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6中的一项或几项。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述表达载体包括pET21a和/或pET28a-his-MBP。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述pET28a-his-MBP载体的核酸序列包括SEQ ID NO.7所示序列。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞包括E.coli。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3包括：

S31、将不同分子量大小的发光蛋白对应置于碳酸盐缓冲液中，且所述碳酸盐缓冲液浓度为0.1M，pH为9.5-10.5，以获得若干包含有对应分子量大小发光蛋白的碳酸盐缓冲液体系；

S32、将染料溶解于质量分数10％的SDS溶液中，以获得质量分数为1-2％的染料溶液；

S33、将每一包含有对应分子量大小发光蛋白的碳酸盐缓冲液体系分别与染料溶液进行混合，55-65℃条件下孵育25-35min；且按体积比计，每一碳酸盐缓冲液体系：染料溶液＝1：(0.5-1.5)；

S34、加入与发光蛋白总质量相等的赖氨酸，于55-65℃条件下作用10min，除去多余的染料，调整发光蛋白浓度至约0.15-0.25mg/ml，以获得不同分子量的预染蛋白。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述染料包括Remazol。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述可曝光预染蛋白marker的分子量为35-200kDa。

9.一种根据权利要求1-8任一项所述制备方法制备获得的可曝光预染蛋白marker。

10.一种权利要求9所述可曝光预染蛋白marker在Western-Blot实验中的应用。