[发明专利]一种快速识别百合地黄汤中化学成分的方法

权利要求书

1.一种快速识别百合地黄汤中化学成分的方法，包括如下步骤：

第一步，供试品溶液的制备：取百合、地黄饮片经提取后浓缩至含有生药量1g/ml的样品溶液，甲醇提取、除杂，制得供试品溶液；

第二步，将供试品溶液注入UHPLC-Q Exactive 轨道阱高分辨质谱联用仪进行测定；

第三步，建立系列成分的UHPLC-Q Exactive轨道阱高分辨质谱分析方法，并结合色谱保留时间、紫外吸收光谱特征、分子量以及多级裂解离子碎片信息进行快速的结构鉴定；

其特征在于：具体包括如下步骤：

第一步，供试品溶液的制备：

（1）取百合、地黄饮片按质量比3:2的比例，用水提取后浓缩至含有生药量1g/ml的样品溶液，取0.2ml样品溶液加1ml的70%甲醇，涡旋1min，超声提取20min，高速离心13000r/min，15min，取上清液过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得；

（2）对照品溶液的制备：分别取各对照品，用甲醇制备含梓醇、毛蕊花糖苷、山柰酚、槲皮素、绿原酸、王百合皂苷A、小檗碱、阿魏酸对照品各1.0 mg/mL的对照品储备液，各取200µL到5 mL 量瓶，用70%甲醇溶液定容，制备成混合对照品溶液；

第二步，将供试品溶液注入UHPLC-Q Exactive 轨道阱高分辨质谱联用仪进行测定：

（1）UHPLC-Q Exactive 轨道阱高分辨质谱分析方法UHPLC条件如下：

以色谱柱为 Waters Acquity UPLC BEH C18 液相色谱柱：2.1 mm×100 mm，1.7 µm，流动相为 A: 0.1%甲酸水溶液； B: 乙腈；梯度洗脱，0 ~ 8 min，2% ~ 15% B；8 ~15 min，15% ~ 35% B；15 ~ 17 min，35% ~ 80% B；17 ~ 20 min，80% ~ 90% B；20 ~ 25 min，2% B；检测波长为 290 nm，柱温为 45℃，流速为 0.2 mL/min，进样量为2 μL；

（2）UHPLC-Q Exactive 轨道阱高分辨质谱分析方法质谱条件如下：

Full MS/DD MS2 TOPN；离子源：电喷雾离子源 HESI；扫描方式：负离子扫描；毛细管温度：320 ℃；鞘气体积流量为 35 psi，辅助气体积流量为10 psi；喷雾电压：负离子模式为2.5 kV，透镜电压55 kPa；探头加温器温度：300℃；最大喷雾电流：100 V；NEC：10，30，50；质量扫描范围均为m/z 100～1500，质量分辨率70000；

第三步，建立系列成分的UHPLC-Q Exactive轨道阱高分辨质谱分析方法，并结合色谱保留时间、紫外吸收光谱特征、分子量以及多级裂解离子碎片信息进行快速的结构鉴定：

将采集到的原始质谱数据运用Xcalibur 3.2 数据软件进行峰提取、峰匹配分析处理；将采集到的原始质谱数据导入 Compound Discover 2.0软件，与数据库进行计算匹配，导出样品名称、保留时间、分子式、质荷比、以及对应的离子强度组成的数据集，参数设置如下：保留时间范围0～25 min；质荷比范围为 100 ~ 1500 Da；偏差为 5 ppm：信噪比为3；保留时间漂移值为0.1 min。