[发明专利]一种具有改善土壤结构功能的微生物肥料及制备方法

权利要求书

1.一种具有改善土壤结构功能的微生物肥料及制备方法，其特征在于，该生物肥料由微生物菌剂和配料组成，所述配料由以下质量份数组分制备：20-30份微生物菌剂、5-10份麸皮、8-12份豆饼、3-4份硫酸锰、4-6份硫酸锌、3-4份硫酸铜、5-9份磷酸二氢钾、1-2份氯化铵、5-7份氯化钙和4-6份硼酸钠；所述微生物菌剂包括圆褐固氮菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂和胶质芽孢杆菌菌剂，每种菌剂活菌数含量如下，三种所述微生物菌剂含水量≤8％，

圆褐固氮菌菌剂中圆褐固氮菌活菌数 2.0～6.0×10⁹个/g

巨大芽孢杆菌中巨大芽孢杆菌活菌数 2.0～6.0×10⁹个/g

胶质芽孢杆菌中胶质芽孢杆菌活菌数 2.0～6.0×10⁹个/g。

2.根据权利要求1所述的具有改善土壤结构功能的微生物肥料及制备方法，其特征在于，该微生物肥料制备方法包括如下步骤：

步骤一、配制培养液：取10g牛肉汁、15g酵母膏、7g黄豆粉、1.8g硫酸锰、0.83g硫酸锌、0.91g硫酸铜、1.05g氯化钙、1.05g硼酸钠和500ml去离子水混合均匀，得到培养液，调节pH值为7.0-7.4后将培养液灭菌消毒后，接种圆褐固氮菌、巨大芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌菌种，接种量分别为2g；

步骤二、将接种后的培养液放置于30-35℃下，转速为200-270r/min恒温培养48h，得到一代混合菌株，将菌株混合液离心分离，得到菌株和上层清液，采用液相色谱检测蛋白质组分和含量；然后将培养液离心分离，得到菌株，将菌株接种至培养液中，放置于30-35℃下，恒温培养48h，得到二代混合菌株，然后取上层清液，采用液相色谱检测蛋白质组分和含量，如此反复，直至连续3次测量的蛋白质组分和含量差别小于5％，即得到互相不拮抗的三种菌株混合液；

步骤三、对步骤二得到的菌株进行革兰氏染色，观察菌落状态和分布，采用稀释平板法纯化和提取三种菌株；将三种菌株各自位于各自的培养液中扩大化培养，离心分离出菌株，并将三种菌株混合均匀，制备出微生物菌剂；

步骤四、将豆饼和麸皮机械破碎并干燥，使其含水率低于10％；将硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、磷酸二氢钾、氯化铵、氯化钙和硼酸钠溶解于水中，形成混合溶液，将混合溶液在温度为70-80℃时与豆饼络合，冷却至常温；

再将该冷却后的混合物用碳酸钙粉末吸附包衣处理，包衣厚度为1-2mm，最后再将微生物菌剂配置成水溶液后，喷洒至碳酸钙粉末外部，再用碳酸钙粉末包衣处理，包衣厚度为1.5-2.5mm，即可形成以麸皮和豆饼作为载体的5层结构微生物肥料。

3.根据权利要求1所述的具有改善土壤结构功能的微生物肥料及制备方法，其特征在于，所述平板稀释纯化提取菌株的具体操作为采用无菌吸管挑取步骤二所得的三种菌株的单个菌落，并转移至无菌试管内部，采用去离子水将菌落稀释100倍，然后再用无菌吸管吸取菌落稀释液，并将液体转移至培养液上，然后将培养液在30-35℃培养4-6天；在采用无菌吸管挑取培养液中的单个菌落，并转移至无菌试管内部，如此反复，直至挑选出各个单个菌株为止。

4.根据权利要求1所述的具有改善土壤结构功能的微生物肥料及制备方法，其特征在于，所述步骤一中消毒条件为105-115℃，消毒时间为20-25min。

5.根据权利要求1所述的具有改善土壤结构功能的微生物肥料及制备方法，其特征在于，所述步骤一中用于巨大芽孢杆菌的培养液为10g牛肉汁、15g酵母膏、7g黄豆粉、1.85g硫酸锰、0.85g硫酸锌、0.91g硫酸铜、1.10g氯化钙、1.15g硼酸钠和500ml去离子水混合均匀制备。

6.根据权利要求1所述的具有改善土壤结构功能的微生物肥料及制备方法，其特征在于，所述步骤一中用于胶质芽孢杆菌的培养液由10g牛肉汁、15g酵母膏、7g黄豆粉、1.75g硫酸锰、0.89g硫酸锌、0.87g硫酸铜、1.11g氯化钙、1.12g硼酸钠和500ml去离子水混合均匀制备。

7.根据权利要求1所述的具有改善土壤结构功能的微生物肥料及制备方法，其特征在于，所述步骤三中用于圆褐固氮菌的培养液由10g牛肉汁、15g酵母膏、7g黄豆粉、1.85g硫酸锰、0.83g硫酸锌、0.95g硫酸铜、1.06g氯化钙、1.03g硼酸钠和500ml去离子水混合均匀。