[发明专利]一种生物催化合成甘油葡萄糖苷的方法有效

专利信息
申请号: 201910710353.3 申请日: 2019-08-02
公开(公告)号: CN110438100B 公开(公告)日: 2022-08-09
发明(设计)人: 杨建刚;张同;曾艳;孙媛霞;马延和 申请(专利权)人: 中国科学院天津工业生物技术研究所
主分类号: C12N9/10 分类号: C12N9/10;C12P19/44;C12P19/18
代理公司: 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 代理人: 杨欢
地址: 300308 天津市*** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 一种 生物 催化 合成 甘油 葡萄 糖苷 方法
【权利要求书】:

1.一种生物催化蔗糖和甘油合成甘油葡萄糖苷的方法,其特征是,

A、利用体外多酶反应体系包含蔗糖磷酸化酶(EC 2.4.1.7)和甘油葡萄糖苷磷酸化酶(EC 2.4.1.359),转化蔗糖和甘油合成甘油葡萄糖苷;

所述反应体系中,蔗糖磷酸化酶来源于变形链球菌Streptococcus mutans UA159,命名为SmSP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:4,在UniProt上的编号为P10249;或者来源于明串珠菌Leuconostoc mesenteroides,命名为LmSP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:5,在UniProt上的编号为Q59495;甘油葡萄糖苷磷酸化酶来源于Zhongshania aliphaticivorans,命名为ZaGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:1,在UniProt上的编号为A0A127M3Y3;或者来源于Marinobacter psychrophilus,命名为MpGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2,在UniProt上的编号为A0A0H4I8H1;或者来源于黏附性海洋杆菌Marinobacter adhaerens HP15,命名为MaGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,在UniProt上的编号为E4PMA5;

体外多酶反应体系中,缓冲液的浓度为10-100 mM,蔗糖的浓度为20 mM-2 M,甘油的浓度为20 mM-2 M,蔗糖磷酸化酶用量为0.1-1000U/mL,甘油葡萄糖苷磷酸化酶用量为0.1-1000U/mL;

所述酶催化的反应温度为10-80℃,反应pH为5.0-9.0,反应时间为1-120小时;

B、全细胞催化蔗糖和甘油合成甘油葡萄糖苷的方法,构建包含蔗糖磷酸化酶和甘油葡萄糖苷磷酸化酶的重组菌株,全细胞催化蔗糖和甘油合成甘油葡萄糖苷;

蔗糖磷酸化酶来源于变形链球菌Streptococcus mutans UA159,命名为SmSP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:4,在UniProt上的编号为P10249;或者来源于明串珠菌Leuconostoc mesenteroides,命名为LmSP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:5,在UniProt上的编号为Q59495;甘油葡萄糖苷磷酸化酶来源于Zhongshania aliphaticivorans,命名为ZaGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:1,在UniProt上的编号为A0A127M3Y3;或者来源于Marinobacter psychrophilus,命名为MpGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2,在UniProt上的编号为A0A0H4I8H1;或者来源于黏附性海洋杆菌Marinobacter adhaerens HP15,命名为MaGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,在UniProt上的编号为E4PMA5;

全细胞催化反应体系中,缓冲液的浓度为10-100 mM,蔗糖的浓度为20 mM-2 M, 甘油的浓度为20 mM-2 M,重组菌株的用量为OD600=0.2-200,所述酶催化的反应温度为10-80℃,反应pH为5.0-9.0,反应时间为1-120小时;

C、体外多酶级联合转化高浓度蔗糖和甘油合成甘油葡萄糖苷的方法,高浓度底物为0.5M-2M的蔗糖及甘油,所述多酶反应体系包含蔗糖磷酸化酶(EC 2.4.1.7)和甘油葡萄糖苷磷酸化酶(EC 2.4.1.359);

蔗糖磷酸化酶来源于变形链球菌Streptococcus mutans UA159,命名为SmSP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:4,在UniProt上的编号为P10249;或者来源于明串珠菌Leuconostoc mesenteroides,命名为LmSP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:5,在UniProt上的编号为Q59495;甘油葡萄糖苷磷酸化酶来源于Zhongshania aliphaticivorans,命名为ZaGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:1,在UniProt上的编号为A0A127M3Y3,或者来源于Marinobacterpsychrophilus,命名为MpGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2,在UniProt上的编号为A0A0H4I8H1,或者来源于黏附性海洋杆菌Marinobacter adhaerens HP15,命名为MaGGP,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,在UniProt上的编号为E4PMA5;

上述反应体系中,缓冲液的浓度为20-200 mM,蔗糖的浓度为0.5 M-3 M,甘油的浓度为0.5 M-3 M,蔗糖磷酸化酶用量为0.1-1000U/mL,甘油葡萄糖苷磷酸化酶用量为0.1-1000U/mL;

所述酶催化的反应温度为10-80℃,反应pH为5.0-9.0,反应时间为1-120小时。

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