[发明专利]凋亡小体保存液及凋亡小体的保存方法

说明书

本发明提供了一种凋亡小体冷冻保存液及凋亡小体的的体外长期保存方法，本发明提供的冷冻保存液，包含以下组分：冷冻保护剂、抗氧化剂和缓冲液。通过本发明的技术方案，可以为干细胞治疗、美容产业转化提供稳定的凋亡小体来源。

技术领域

本发明属于凋亡小体技术领域，尤其涉及一种间充质干细胞凋亡小体体外长期保存的保存液和凋亡小体的保存方法。

背景技术

间充质干细胞是干细胞的一个研究分支，干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞，它们可以不断地自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。干细胞是机体的起源细胞，是形成人体各种组织器官的始祖细胞。

间充质干细胞的临床研究已经在许多国家开展，美国批准了60余项临床试验，随着间充质干细胞及其相关技术的日益成熟，我国也批准了多项临床试验，走入了间充质干细胞核心技术研发的舞台。我国已经大力加强干细胞研究工作的开展，包括国家昂赛细胞基因工程有限公司、细胞产品国家工程研究中心在内的多家权威研究机构以及各地方脐带血库已将研究技术引向临床。对于间充质干细胞用于治疗十余种难治性疾病的治疗研究，除了用来促进恢复造血，与造血干细胞共移植提高白血病和难治性贫血等以外，还用于心脑血管疾病，肝硬化、骨和肌肉衰退性疾病、脑和脊髓神经损伤、老年痴呆及红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病的治疗研究，已经取得的部分临床试验结果令人鼓舞。

凋亡细胞经核碎裂形成的染色质块(核碎片)，然后整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一个球形的突起，并在其根部绞窄而脱落形成一些大小不等，内含胞质、细胞器及核碎片的小体称为凋亡小体。

凋亡小体的形成可以通过两种方式一是通过发芽脱落机制：凋亡细胞内聚集的染色质块，经核碎裂形成大小不等的染色质块，然后整个细胞通过出芽、起泡等方式形成一个球形的膜包小体，内含胞质、细胞器和核碎片，脱落形成凋亡小体。二是通过自噬体形成机制：凋亡细胞内线粒体、内质网等细胞器和其它胞质成分一起被内质网膜包裹形成自噬体，与凋亡细胞膜融合后，自噬体排出细胞外成为凋亡小体。

经检索发现目前对于凋亡小体的应用方面申请号CN201580039370.9的专利阐述了凋亡小体的医学治疗应用及其分离方法，但未对凋亡小体的保存以及应用方式进行进行阐述，现有技术也没有公开凋亡小体的长期保存方法，不便于大规模产业化应用。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种凋亡小体保存液及凋亡小体的的体外长期保存方法，通过本发明的技术方案，可以为干细胞治疗，美容产业转化提供稳定地凋亡小体来源。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明第一方面，提供一种凋亡小体的冷冻保存液，包含以下组分：冷冻保护剂、抗氧化剂和缓冲液。

优选地，所述冷冻保护剂选自羟乙基淀粉、甘油、人血清白蛋白和海藻糖。

优选地，所述抗氧化剂选自维生素C。

优选地，所述缓冲液选自氨基酸注射液、葡萄糖注射液、生理盐水或乳酸钠林格注射液中的一种或多种。

本发明第二方面，提供一种凋亡小体冷冻保存液，按照重量份数，包含：羟乙基淀粉5-10份、甘油5份、人血清白蛋白10-20份、海藻糖5份、维生素C注射液0.1-1份、氨基酸注射液5-10份、葡萄糖注射液1-5份和生理盐水45-65份。

优选地，所述羟乙基淀粉的重量份数为5份、6份、7份、8份、9份或10份。

优选地，所述人血清白蛋白的重量份数为10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份或20份。

优选地，所述维生素C注射液的重量份数为0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份或1份。