[发明专利]一种检测尿液中同型半胱氨酸的方法

权利要求书

1.一种检测尿液中同型半胱氨酸的方法，其特征在于，以同位素内标为校准品，以尿液中的肌酐含量来均一化不同个体的尿液浓度的差异，结合UPLC-MS/MS技术检测尿液中同型半胱氨酸的浓度。

2.一种检测尿液中同型半胱氨酸的方法，所述方法包括：

步骤1，配制样品：

1a.配制标品溶液，所述标品溶液为多个浓度的同型半胱氨酸标品溶液和多个浓度的肌酐标品溶液；优选地，多个浓度的同型半胱氨酸标品溶液的数目可以为至少3个，优选为4个至10个，更优选为4个、5个或6个；优选地，多个浓度的肌酐标品溶液的数目可以为至少3个，优选为4个至10个，更优选为4个、5个或6个；

1b.配制同位素内标溶液，其为同型半胱氨酸同位素内标溶液和肌酐同位素内标溶液；优选地，所述同型半胱氨酸同位素内标为同型半胱氨酸二聚体的氘代化合物，优选同型半胱氨酸二聚体的八氘代化合物；优选地，所述肌酐同位素内标为肌酐的氘代化合物，优选肌酐的三氘代化合物；优选地，所述同位素内标溶液的溶剂为甲醇、甲酸或其混合物的水溶液；

步骤2，样品预处理，得到含同位素内标的标品溶液和含同位素内标的尿样，其中，所述样品预处理包括：

2a.向尿液和标品溶液中加入的相应的同位素内标溶液；

2b.使尿液和标品溶液经还原剂进行还原；所述还原剂例如为用于还原同型半胱氨酸的分子间或分子内二硫键的化合物，优选为二硫苏糖醇；

2c.对尿液进行去除蛋白；优选地，所述去除蛋白包括对所述尿液先进行沉淀得到上清液，然后对所述上清液进行滤除；优选地，所述滤除包括先高速离心，再经0.22μm滤膜过滤所述上清液；

步骤3，构建标准曲线，其中将步骤2的含同位素内标的标品溶液进行UPLC-MS/MS测定；

步骤4，获得经肌酐浓度归一化的同型半胱氨酸浓度，其中，将步骤2的所述含同位素内标的尿样进行UPLC-MS/MS分析，结合步骤3得到的标准曲线获得同型半胱氨酸浓度和肌酐浓度；进而获得经肌酐浓度归一化的同型半胱氨酸浓度。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述尿液选自新鲜尿液、经长期低温冻存的尿液、或干尿液；所述新鲜尿液直接进行检测；经长期低温冻存的尿液地优选在低温冻存前在尿液加入叠氮化钠，优选加入叠氮化钠的量为尿液体积的0.05％至5％，优选为0.1％至2.5％，更优选为1％。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，在步骤2中，所述沉淀包括在尿液中加入沉淀缓冲液，优选为1ml/L甲酸的乙腈溶液；或者，所述沉淀包括在低温如-15度至-30度，优选在-20度，沉淀约20分钟至数小时，优选为20分钟至1小时，更优选为30分钟。