[发明专利]一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP的PCR-RFLP方法在审
申请号: | 201910716177.4 | 申请日: | 2019-08-05 |
公开(公告)号: | CN110317885A | 公开(公告)日: | 2019-10-11 |
发明(设计)人: | 李密杰;张春梅 | 申请(专利权)人: | 红河学院 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12Q1/683;C12N15/11 |
代理公司: | 昆明合盛知识产权代理事务所(普通合伙) 53210 | 代理人: | 吴茜 |
地址: | 661100 云南省红*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 免疫性状 限制性片段长度多态性 单核苷酸多态性位点 杀菌通透性增强蛋白 单核苷酸多态性 琼脂糖凝胶电泳 标记辅助选择 基因遗传变异 凝胶成像系统 限制性内切酶 关系提供 基因序列 技术支持 科学数据 快速检测 快速建立 遗传育种 种质资源 基因 种检测 检测 酶切 分析 研究 | ||
1.一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法,其特征在于,以大围山微型鸡基因组DNA或包含BPI基因的DNA序列为模板,在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下,利用一对聚合酶链式反应引物,在PCR条件下进行扩增,然后利用限制性内切酶对其进行酶切,再通过电泳检测即可鉴定大围山微型鸡BPI基因SNP位点;
所述的聚合酶链式反应引物包括:
上游引物:5'-GTGCTTCCTTCCTATTCTGC-3';
下游引物:5'-CTCAAAACCTGCTTCCACC-3'。
2.根据权利要求1所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法,其特征在于,所述的PCR扩增的条件是:25μL反应体系,包括1U Taq DNA聚合酶,10×Buffer 2.5μL,25mol/L MgCl2 1.5μL,2.5mmol/L dNTPs2.5μL,50ng大围山微型鸡基因组DNA或含杀菌通透性增强蛋白基因序列的DNA,10pmol/μL上、下游引物各0.25μL,灭菌超纯水15.0μL;
PCR反应程序为:95℃预变性5min,94℃ 30s,57.9℃ 30s,72℃ 30s共30~35个循环,最后72℃延伸10min,4℃保存。
3.根据权利要求1所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法,其特征在于,所述的限制性内切酶为Taq I;
25-30μL Taq I酶切体系为:10-15μL权利要求2中的PCR产物,2.5-3.0μL10×缓冲液(含BSA),1.0-1.5μL的浓度10U/μL的Taq I限制性内切酶,11.5-16.5μL灭菌纯水(H2O),酶切消化条件:65℃恒温水浴摇床中消化1h左右。
4.根据权利要求1所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法,其特征在于,所述的BPI基因单核苷酸多态性位点为为大围山微型鸡BPI基因第5外显子的NC_006107.4:g.3588T>C变异位点。
5.根据权利要求1所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法,其特征在于,所述的限制性内切酶为能切割该位点的相应的限制型内切酶。
6.根据权利要求1或5所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法,其特征在于,所述的限制性内切酶为Taq I。
7.一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括PCR反应扩增试剂以及用于扩增样本DNA中BPI的PCR引物。
8.根据权利要求7所述的一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的试剂盒,其特征在于,所述PCR反应扩增试剂包括Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs。
9.根据权利要求8所述的一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的试剂盒,其特征在于,所述PCR引物为:
上游引物:5'-GTGCTTCCTTCCTATTCTGC-3';
下游引物:5'-CTCAAAACCTGCTTCCACC-3'。
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