[发明专利]一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP的PCR-RFLP方法在审
| 申请号： | 201910716177.4 | 申请日： | 2019-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN110317885A | 公开（公告）日： | 2019-10-11 |
| 发明（设计）人： | 李密杰;张春梅 | 申请（专利权）人： | 红河学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12Q1/683;C12N15/11 |
| 代理公司： | 昆明合盛知识产权代理事务所(普通合伙) 53210 | 代理人： | 吴茜 |
| 地址： | 661100 云南省红*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 免疫性状 限制性片段长度多态性 单核苷酸多态性位点 杀菌通透性增强蛋白 单核苷酸多态性 琼脂糖凝胶电泳 标记辅助选择 基因遗传变异 凝胶成像系统 限制性内切酶 关系提供 基因序列 技术支持 科学数据 快速检测 快速建立 遗传育种 种质资源 基因 种检测 检测 酶切 分析 研究 | ||
1.一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法，其特征在于，以大围山微型鸡基因组DNA或包含BPI基因的DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用一对聚合酶链式反应引物，在PCR条件下进行扩增，然后利用限制性内切酶对其进行酶切，再通过电泳检测即可鉴定大围山微型鸡BPI基因SNP位点；
所述的聚合酶链式反应引物包括：
上游引物：5'-GTGCTTCCTTCCTATTCTGC-3'；
下游引物：5'-CTCAAAACCTGCTTCCACC-3'。
2.根据权利要求1所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法，其特征在于，所述的PCR扩增的条件是：25μL反应体系，包括1U Taq DNA聚合酶，10×Buffer 2.5μL，25mol/L MgCl2 1.5μL，2.5mmol/L dNTPs2.5μL，50ng大围山微型鸡基因组DNA或含杀菌通透性增强蛋白基因序列的DNA，10pmol/μL上、下游引物各0.25μL，灭菌超纯水15.0μL；
PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃ 30s，57.9℃ 30s，72℃ 30s共30～35个循环，最后72℃延伸10min，4℃保存。
3.根据权利要求1所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法，其特征在于，所述的限制性内切酶为Taq I；
25-30μL Taq I酶切体系为：10-15μL权利要求2中的PCR产物，2.5-3.0μL10×缓冲液(含BSA)，1.0-1.5μL的浓度10U/μL的Taq I限制性内切酶，11.5-16.5μL灭菌纯水(H2O)，酶切消化条件：65℃恒温水浴摇床中消化1h左右。
4.根据权利要求1所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法，其特征在于，所述的BPI基因单核苷酸多态性位点为为大围山微型鸡BPI基因第5外显子的NC_006107.4：g.3588T>C变异位点。
5.根据权利要求1所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法，其特征在于，所述的限制性内切酶为能切割该位点的相应的限制型内切酶。
6.根据权利要求1或5所述的检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的PCR-RFLP方法，其特征在于，所述的限制性内切酶为Taq I。
7.一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR反应扩增试剂以及用于扩增样本DNA中BPI的PCR引物。
8.根据权利要求7所述的一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应扩增试剂包括Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs。
9.根据权利要求8所述的一种检测大围山微型鸡BPI基因SNP位点的试剂盒，其特征在于，所述PCR引物为：
上游引物：5'-GTGCTTCCTTCCTATTCTGC-3'；
下游引物：5'-CTCAAAACCTGCTTCCACC-3'。
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