[发明专利]一种鉴定水稻抗稻瘟病基因Pigm的四引物分子标记方法

权利要求书

1.一种鉴定水稻穗颈瘟抗性的四引物分子标记方法，其特征在于，用所述的四引物对水稻Pigm基因型进行检测，所述四引物为：

正向外引物Pigm-O-F 序列为5’- TAAGAATTGAGGTGGTTAGTTGAACGGAGA -3’、

反向外引物Pigm-O-R序列为5’- TTGCATGGCTCCACTACCCACTATAAG -3’、

正向内引物Pigm-I-F序列为5’- TGAAAATAAAAATGGTATGATGGTTACG -3’、

反向内引物Pigm-I-R序列5’- TAGGGATGAAACGGCTCGAAAACGATCG -3’；

用所述四引物正向外引物Pigm-O-F、反向外引物Pigm-O-R、正向内引物Pigm-I-F和反向内引物Pigm-I-R扩增水稻基因组DNA，如果同时有684 bp和295 bp两条特征条带，则为含Pigm基因的纯合体，具有穗颈瘟抗性；如果同时有684 bp和444 bp两条特征条带，则为不含Pigm基因的纯合体，不具有穗颈瘟抗性；如果同时存在684 bp、444 bp和295 bp三条特征条带，则为含Pigm基因杂合体，具有穗颈瘟抗性；所述水稻为：以淮稻9号为母本、谷梅4号为父本的F₂群体或以谷梅4号为供体、南粳505为受体的回交育种子代群体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

（1）水稻植株基因组DNA的提取；

（2）将权利要求1所述的四引物Pigm-O-F、Pigm-O-R、Pigm-I-F和Pigm-I-R加入同一PCR反应体系，并对水稻植株的基因组DNA进行扩增；

20μL PCR体系包括10 ng/μL DNA 2.0μL，4 pmol/μL正反向引物2.0μL，其中引物Pigm-O-F、Pigm-O-R、Pigm-I-F和Pigm-I-R各0.5μL ，含25 mmol/L MgCl₂的10×缓冲液2.0μL，2.5 mmol/L 的dNTP 0.4μL，5 U/μL 的Taq 0.5μL，ddH₂O 13.1μL；

反应程序包括：95℃下预变性5 min，95℃下变性30 s，55℃下复性30 s，72℃下延伸1min，循环35次后，72℃下延伸7 min，10℃冷却10 min，将扩增产物加入上样缓冲液终止反应；

（3）反应产物在质量比浓度为3.0%的琼脂糖凝胶上130V电泳30 min，经DuRed核酸染色并于凝胶成像系统下观察，记载。

3.权利要求1-2任一所述方法在鉴定水稻穗颈瘟抗性中的应用，其特征在于，所述水稻为：以淮稻9号为母本、谷梅4号为父本的F₂群体或以谷梅4号为供体、南粳505为受体的回交育种子代群体。

4.权利要求1-2任一所述方法在含Pigm基因抗穗颈瘟水稻育种方面的应用，其特征在于，所述水稻为：以淮稻9号为母本、谷梅4号为父本的F₂群体或以谷梅4号为供体、南粳505为受体的回交育种子代群体。