[发明专利]一种复合功能型微载体及其制备方法在审

专利信息
申请号: 201910717610.6 申请日: 2019-08-05
公开(公告)号: CN110484486A 公开(公告)日: 2019-11-22
发明(设计)人: 夏海锋;李金东;邱波 申请(专利权)人: 嘉兴千纯生物科技有限公司
主分类号: C12N5/00 分类号: C12N5/00;C08B37/02
代理公司: 33304 杭州永航联科专利代理有限公司 代理人: 侯兰玉<国际申请>=<国际公布>=<进入
地址: 314200 浙江省嘉兴市平湖*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 复合功能 微载体 聚赖氨酸 细胞培养 生物技术领域 细胞贴壁生长 表面修饰 测试表面 二乙氨基 共价偶联 结合位点 微球载体 污染功能 细胞扩增 新型载体 原核细菌 交联型 葡聚糖 微球基 正电荷 抗菌 配基 外源 乙基 制备 复合
【权利要求书】:

1.一种复合功能型微载体,其特征在于:该复合功能型微载体的微球基球为交联型葡聚糖,共价偶联的功能配基为二乙氨基乙基和Ɛ-聚赖氨酸的复合。

2. 根据权利要求1所述的复合功能型微载体,其特征在于,葡聚糖为葡聚糖明串珠菌发酵而成的alpha-葡聚糖(右旋糖酐),平均分子量为100-150 kDa;Ɛ-聚赖氨酸为白色链霉菌发酵而成,聚合度为25-35之间。

3. 根据权利要求1所述的复合功能型微载体,其特征在于,微载体的离子交换容量为150~180 μmol/mL,含水率为85~92%,湿真密度为0.85~0.95 g/mL,粒径尺寸范围为50-250μm。

4.根据权利要求1所述的复合功能型微载体,其特征在于,二乙氨基乙基由2-二乙氨基氯乙烷盐酸盐提供,2-二乙氨基氯乙烷盐酸盐添加量为葡聚糖微球质量的20%-40%;Ɛ-聚赖氨酸与葡聚糖微球的质量比为1:5-1:10。

5. 一种权利要求1所述的复合功能型微载体的制备方法,其特征在于,该制备方法包括以下步骤:

1)交联型葡聚糖制备

将葡聚糖分散于氢氧化钠溶液中,加热溶解至透明,得到水相;

甲苯,作为有机相;

将水相缓慢加入有机相中,搅拌使其分散均匀后,加入环氧氯丙烷,环氧氯丙烷与水相的体积比为1:3-1:6,反应充分后抽滤除有机相,依次经乙醇、水清洗后,得到湿态的葡聚糖微球;用筛网进行筛分获得所需粒径尺寸的微球;

2)复合功能基团的偶联

葡聚糖微球抽干,加入适量3-6 M 的NaOH溶液,加入2-二乙氨基氯乙烷盐酸盐进行表面修饰,充分反应后,加入1,4-丁二醇二缩水甘油醚,继续反应至充分,反应结束后依次用乙醇、水清洗微球;将清洗后的微球抽干,加入适量3-6 M 的NaOH溶液和Ɛ-聚赖氨酸,反应后,依次用乙醇、水清洗,得到复合功能型微载体。

6. 根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中,葡聚糖和氢氧化钠溶液的质量体积比是1:50-1:150,氢氧化钠溶液的浓度为5-10 M。

7.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中,2-二乙氨基氯乙烷盐酸盐添加量为葡聚糖微球质量的20%-40%。

8.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中,1,4-丁二醇二缩水甘油醚添加量为葡聚糖微球的100%-160%(体积:质量),葡聚糖微球与氢氧化钠溶液的用量比(g:ml)为1:1-2。

9.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中,Ɛ-聚赖氨酸与葡聚糖微球的质量比为1:5-1:10。

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