[发明专利]一种基于ELISA的小分子检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于分子检测领域，涉及一种基于ELISA的小分子检测试剂盒及检测方法。该试剂盒包括：磷酸盐缓冲液、抗体A溶液、复合物溶液、显色溶液和至少一块酶联板；其中，所述抗体A溶液中的抗体A为所述小分子的特异性抗体；所述复合物溶液中的复合物为小分子与识别元件形成的复合物；所述酶联板中固定有预包被抗体B，所述抗体B为所述识别元件的特异性抗体。本发明的小分子的识别元件衍生物在溶液中而非固定化，可以更充分地暴露抗原表位，竞争反应可以更充分地进行，使得该竞争结合反应灵敏度更高。此外，基于预包被抗体可以实现不同待测物的通用性检测。

技术领域

本发明属于分子检测领域，更具体地，涉及一种基于ELISA的小分子检测试剂盒和一种基于ELISA的小分子检测方法。

背景技术

在小分子检测领域，基于抗原抗体特异性识别原理的酶联免疫吸附检测(ELISA)试剂盒的测定原理是：将待测物特异性抗原预先固定到酶联板，在缓冲液体系下，样品中的待测小分子与固定化抗原竞争结合溶液中的标记抗体。酶标孔显色强度或者信号强度与待测小分子含量呈反比。

由于测定灵敏度高、特异性强，ELISA检测法在食品安全、临床医疗等多个领域已经得到越来越广泛的应用。

但是，传统ELSIA技术上存在一定的不足：1、待测物抗原固定化不利于竞争结合反应充分进行，限制了检测灵敏度。2、能够将高灵敏与通用性检测相结合的ELISA检测技术尚未见报道。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是针对现有ELISA试剂盒的不足，提供一种基于ELISA 的小分子检测试剂盒及检测方法。该检测试剂盒和检测方法具有灵敏性和通用性，应用范围广，具有广阔的市场前景。

为了实现上述目的，本发明提供一种基于ELISA的小分子检测试剂盒，该试剂盒包括：磷酸盐缓冲液、抗体A溶液、复合物溶液、显色溶液和至少一块酶联板；其中，

所述抗体A溶液中的抗体A为所述小分子的特异性抗体；

所述复合物溶液中的复合物为小分子与识别元件形成的复合物；

所述酶联板中固定有预包被的抗体B，所述抗体B为所述识别元件的特异性抗体。

现有小分子物质的检测方法多种，例如，通过酶联孔固定化复合物，与待测物竞争结合酶标记抗体经过显色反应，实现小分子物质的检测。而在实际应用中，该方法存在检测灵敏度与通用性难以融合的问题，经研究发现，由于待检测物质在酶联孔上预设的包被原导致免疫反应不够充分，进而影响其检测灵敏度。另外，由于包被原具有待检物特异性，因此使得 ELISA检测反应不具备通用性检测能力。

本发明将待检测物、抗体和复合物孵育，采用在非固定化条件下孵育的方式进行竞争结合反应，使得竞争反应进行更充分，测定灵敏度更高。并且，本发明中酶联孔中的包被原具有通用性识别能力，可以识别复合物中的识别元件，使得ELISA检测方法具备了通用性检测的特点。

本发明中，若待检测物中含有目标小分子，则得到的混合物包括抗体-小分子和抗体-小分子-识别元件；若待检测物中不含有目标小分子，则得到的混合物包括抗体-小分子-识别元件。本发明中的识别元件-小分子作为竞争性反应的原料，通过酶联孔的信号强度判断待检测物中小分子的含量，该方法更准确、更灵敏。本发明提供的小分子检测试剂盒，为小分子物质的通用性检测提供了平台。

根据本发明，所述识别元件优选为具有与目标小分子结合属性的通用性识别元件，采用通用性识别元件物质作为识别小分子物质的结合物质，使得本发明的试剂盒应用范围广。具体地，所述识别原件优选为卵清蛋白 (OVA)、血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA) 和鸡卵白蛋白(THY)中的至少一种。