[发明专利]一种抗人泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种鼠抗人泛素羧基末端水解酶‑1(UCH‑L1)的单克隆抗体,所述的抗体是由保藏号为:CGMCC No.18188的杂交瘤细胞株UMAB244分泌产生。所述抗体的免疫原为真核细胞293T表达的UCH‑L1全长蛋白，其轻链(VL)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,其重链(VH)的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示。所述抗体的VL包括3个抗原决定簇：CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.3‑5所示，所述抗体的VH区域包括3个抗原决定簇：CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.6‑8所示。本发明的抗UCH‑L1单克隆抗体可应用于检测UCH‑L1的各种免疫检测试剂盒的制备，包括但不限于双抗体夹心ELISA或化学发光法试剂盒的制备，为与UCH‑L1相关的疾病诊断提供辅助手段，也为下一步工程抗体的制备提供基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗人泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)的单克隆抗体及其在免疫检测方面应用。

背景技术

UCH-L1又称为蛋白基因产物9.5(protein gene product，PGP9.5)，是去泛素化酶UCHs家族中的一员，它是由单基因编码的半胱氨酸蛋白水解酶。UCH-L1由223个氨基酸组成，分子量为27kDa。UCH-L1是在神经元分化的各个阶段广泛表达于神经元组织中的泛素水解酶，并特异性地表达于神经元和弥散神经内分泌系统的细胞及其肿瘤中。UCHL1在大脑的大多数部分表达，在中脑的黑质表达尤其高。UCH-L1的三维结构显示，UCH-L1由7个α-螺旋和6个β折叠组成，且β折叠被α螺旋所包围。体外诱导研究发现，移除UCH-L1氨基端或羧基端少量的氨基酸均可破坏其三级结构，暴露出疏水核心，导致UCH-L1与泛素的亲和力降低，最终导致不溶性聚集体形成。同时UCH-L1的晶体结构显示，UCH-L1中存在一个交叉环结构，当UCH-L1与泛素连接时，交叉环的直径变宽进而暴露出活性位点，UCH-L1处于活化状态；而当UCH-L1未连接泛素时，该交叉环能够阻碍活化位点的暴露，UCH-LI处于失活状态。

UCH-L1作为UPS系统重要的组成部分，通过调节蛋白质的泛素化修饰而参与蛋白质的降解。UCH-L1具有泛素水解酶和泛素连接酶活性，以及不依赖于自身酶活性的稳定单体的功能。UCH-L1可以通过其泛素水解酶活性特异性切割泛素和蛋白底物之间的异肽键产生泛素单体，在胞内底物蛋白质经UPS降解和泛素单体的循环利用过程中发挥重要作用。此外，当UCH-L1二聚体的形式存在时，具有不依赖于ATP酶活性的泛素连接酶活性，能够形成K63连接的多聚泛素链。