[发明专利]一种白桦胚性愈伤组织诱导培养基、诱导胚性愈伤组织的方法及组培苗的培育方法

说明书

本发明提供了一种白桦胚性愈伤组织诱导培养基、诱导胚性愈伤组织的方法及组培苗的培育方法，属于植物组织培养技术领域。本发明提供的白桦胚性愈伤组织诱导培养基，以MS培养基为基本培养基，还包括以下含量组分：2,4‑D 2mg/L、NAA 0.2mg/L、琼脂5.5g/L和蔗糖40g/L；所述胚性愈伤组织诱导培养基的pH值为5.8。利用本发明的培养基愈伤诱导率高达90％以上，胚性愈伤诱导率达19％以上。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种白桦胚性愈伤组织诱导培养基、诱导胚性愈伤组织的方法及组培苗的培育方法。

背景技术

白桦(Betula platyphalla)属于桦木科，桦木属，高15-20m，胸径达50cm。主要分布在东北地区的背部，产于大小兴安岭、完达山等林区。在东北的张广才岭、老爷岭等山区则以东北白桦为主。白桦与东北白桦是东北的乡土树种，姿态优美，树皮光滑洁白，小枝红褐色，具有很高的观赏价值。白桦属于强阳性树种，喜光、耐寒、耐水湿，生长迅速。由于它分布范围比较广，并有耐寒、生长快及材质优良等特点，所以是一个重要的工业用材树种。另外，白桦是单板、胶合板生产加工原料的首选材料，也是航空胶合板面板不可替代的树种；同时又可作工艺材、家具材、纸浆材等，在餐饮业和医药业中也广为利用。为了扩大繁殖白桦优良品种和类型，保持其优良性状，急需解决白桦无性繁殖技术。随着组织培养技术在林业上的不断应用，利用组织培养技术获得再生植株称为快速繁殖白桦优良无性系的首选手段。

现有技术多利用器官发生再生植株，但其需要经过脱分化和再分化过程，而且芽和根要分别在不同条件下诱导，因而时间长，而细胞变异的频率又是随着继代次数和培养时间的延长而增加。现有技术中还未有有关白桦体细胞胚诱导的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种白桦胚性愈伤组织诱导培养基、诱导胚性愈伤组织的方法及组培苗的培育方法。使用本发明诱导方法愈伤诱导率高达90％以上，胚性愈伤诱导率达19％以上。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

白桦胚性愈伤组织诱导培养基，以MS培养基为基本培养基，还包括以下含量组分：2,4-D 2mg/L、NAA 0.2mg/L、琼脂5.5g/L和蔗糖40g/L；

所述胚性愈伤组织诱导培养基的pH值为5.8。

本发明提供了一种基于白桦未成熟胚诱导胚性愈伤组织的方法，包括：

选取白桦未成熟胚进行消毒，将消毒的白桦未成熟胚接种于上述技术方案所述的胚性愈伤组织诱导培养基上，在24～26℃下进行光暗交替培养，继代培养4周，得到胚性愈伤组织；所述光暗交替培养过程中，光培养的时间为16h，所述暗培养的时间为8h。

优选地，所述未成熟胚为授粉15～25d的球型至心型期的未成熟胚。

优选地，所述消毒的方法包括：将未成熟的胚依次用酒精溶液浸泡，用水冲洗后，再与次氯酸钠溶液混合消毒后，用水冲洗；所述酒精溶液的体积浓度为70％，浸泡时间为30s；所述次氯酸钠溶液的质量浓度为3％，消毒时间为10min。

优选地，在用次氯酸钠溶液混合消毒时，还包括加入占次氯酸钠溶液总体积0.02％的吐温-20。

优选地，所述光暗交替培养过程中，光照强度为36μmol·m^-2·s^-1。

本发明提供了一种组培苗的培育方法，包括如下步骤：

a.将上述技术方案所述方法制备得到的胚性愈伤组织接种至体细胞胚诱导培养基上在25℃培养2个月，得到白桦体细胞胚；

b.将所述步骤a得到的白桦体细胞胚接种至生根培养基上在25℃培养1～2个月，得到白桦再生组培苗。