[发明专利]一种肉类食品中N-亚硝胺类化合物的检测方法

说明书

本发明涉及一种肉类食品中N‑亚硝胺类化合物的检测方法，所述检测方法包括超声提取、样品处理、液相色谱‑三重四级杆串联质谱分析检测(LC‑MS/MS)和定性及定量分析。本发明的优点在于：本发明检测食品中N‑亚硝胺类化合物的方法，其中，涉及的样品处理过程(浓缩、GPC净化、浓缩及溶剂置换)由在线联机完成，实现自动处理，所涉及的检测分析采用LC‑MS/MS完成。因此，该方法具有操作便捷、灵敏度高的特点，满足肉类食品中低含量N‑亚硝胺类化合物的检测需求。

技术领域

本发明属于食品安全领域，特别涉及一种肉类食品中N-亚硝胺类化合物的检测方法。

背景技术

亚硝胺类化合物因具有致癌性且在动物性食品中存在较为广泛，被认为是当今四大食品污染物之一。此外，亚硝胺类化合物作为消毒副产物饮用水中被检出，在制药领域中N-二甲基亚硝胺(NDMA)等作为基因毒性杂质也备受关注。

目前，关于食品、水质、药品中亚硝胺类化合物的分析方法有很多，主要包括气相色谱法(GC)、液相色谱法(LC)、胶束电动毛细管色谱法(MEKC)、气相色谱-热能分析法(GC-TEA)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)等。由于亚硝胺在各类物质中含量很低,需要较高的灵敏度，因此，采用色谱质谱联用技术，特别是色谱与串联质谱联用是研究的热点。

对于肉类食品而言，由于生物基质干扰较大，严重制约检测分析，因此，高效的前处理净化技术已成为影响检测的关键因素。针对食品中亚硝胺类化合物检测的前处理有水蒸气蒸馏-液液萃取、固相萃取(SPE)、分散固相萃取净化技术(QuEChERS)等。

凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography，GPC)是一种常用的食品样品净化处理方法，能够有效去除脂肪、蛋白质、多糖等大分子物质。

本发明提供了一种基于GPC前处理、在线浓缩并利用液相色谱-三重四级杆串联质谱分析肉类食品中N-亚硝胺类化合物的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能够简化样品前处理过程步骤、操作便捷、灵敏度高且能够满足食品中低含量N-亚硝胺类化合物检测需求的检测食品中N-亚硝胺类化合物的方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种肉类食品中N-亚硝胺类化合物的检测方法，其创新点在于：所述检测方法包括超声提取、样品处理、液相色谱-三重四级杆串联质谱分析检测(LC-MS/MS)和定性及定量分析，具体步骤如下：

步骤1：超声提取：将待测食品样品粉碎，称取20-25g，然后加入50mL二氯甲烷，超声提取20-30min，过滤后收集滤液，用二氯甲烷重新定容至50mL；

步骤2：样品处理：样品处理采用在线固相萃取/凝胶净化/定量浓缩多联机系统，所用模式为定量浓缩-凝胶净化-定量浓缩，具体包括如下步骤：

步骤a.浓缩：将步骤1定容后的滤液进行浓缩，进样体积30mL,水加热温度36℃，锥底部温度38℃，两步浓缩至终体积6mL；

步骤b.凝胶净化:将步骤a获得的浓缩液在线进行凝胶净化，其中，凝胶净化色谱条件为：凝胶渗透色谱柱:32cm×2.5cm，凝胶填料Bio Beads S-X3，200-400目；流动相:二氯甲烷；流速:5.0mL/min；进样量:5.0mL；紫外检测波长:254nm；弃去前16min色谱流出液，收集17-47min流分，淋洗3min；

步骤c.浓缩及溶剂置换：将步骤b收集的流分通过在线浓缩装置浓缩至1mL,温度参数为：水加热温度36℃，锥底部温度38℃；加入15-20mL乙腈，再次浓缩至1mL,温度参数为：水加热温度50℃，锥底部温度52℃；继续加入4-9mL乙腈或超纯水，具体体积记为V,获得待测溶液；