[发明专利]一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075及其突变株、突变蛋白和应用有效

专利信息
申请号: 201910720978.8 申请日: 2019-08-06
公开(公告)号: CN110563815B 公开(公告)日: 2022-04-08
发明(设计)人: 杨洪江;孙利;张志强;李东航;尤甲甲 申请(专利权)人: 天津科技大学
主分类号: C07K14/005 分类号: C07K14/005;C12N7/00;C12R1/92
代理公司: 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 代理人: 韩晓梅
地址: 300457 天津市滨*** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 一种 铜绿 假单胞菌 噬菌体 k8 假定 蛋白 gp075 及其 突变 应用
【说明书】:

本发明涉及一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075,其核苷酸序列为SEQ No.1,其氨基酸序列为SEQ No.10。本假定蛋白GP075发生突变,突变后的蛋白具有结构蛋白的功能,该类噬菌体突变株在原识别脂多糖的基础上,增加了额外的受体识别蛋白,可识别脂多糖O‑抗原缺陷型宿主细胞或者只含有核心寡糖结构(core oligosaccharides)的宿主细胞,同时具有更宽的宿主范围、更强的裂解及吸附宿主细胞的能力,有望应用于噬菌体制剂,防治铜绿假单胞菌引起的各种感染。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域,尤其是一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075及其突变株、突变蛋白和应用。

背景技术

铜绿假单胞菌是一种条件致病菌,容易感染免疫功能低下、身体虚弱以及囊性纤维病人,导致囊性纤维病人较高的发病率和死亡率。噬菌体作为细菌的天然克星,可特异性杀死细菌,研究噬菌体与宿主之间相互作用,有助于开发噬菌体制剂,用于治疗细菌感染。近几年对铜绿假单胞菌及其噬菌体的研究与日俱增,铜绿假单胞菌的各类噬菌体感染机制越来越清晰,大多数分离的铜绿假单胞菌噬菌体识别受体为脂多糖O-抗原,研究最多是LPS合成相关的基因,主要有wbpL、wbpR、wbpO、algC、wbpV、galU、wbpT、wzy、wapH、migA、ssg和wbpS等。与此同时,大多数噬菌体利用尾部识别细胞受体,在合适的条件下,尾部和受体的相互作用诱导尾部发生结构性重排,最终传导到头-尾连接处,引发其打开,最终使噬菌体DNA释放,完成噬菌体感染过程。在现有的研究基础上铜绿假单胞菌噬菌体受体结合蛋白为尾丝蛋白,对于未知功能的假定蛋白作为受体结合蛋白的研究却很少。

近年来,随着抗菌素的滥用,抗菌素耐受型细菌的数量不断增加,耐受型细菌引起的各类感染疾病问题亟需解决。例如,铜绿假单胞菌是引起院内感染重要的条件致病菌,众所周知,噬菌体能对宿主菌进行感染,而且具有较强的宿主特异性,不影响其它非宿主的正常细胞,所以,研究噬菌体疗法,作为抗菌素的替代品,显得尤为重要。目前研究最多的鸡尾酒疗法,即混合噬菌体疗法(指将多种噬菌体混合使用,达到杀灭多种细菌的一种治疗方法),早在2014年,欧盟启动Phagoburn计划,针对临床上常见的铜绿假单胞菌、埃希氏菌、变形杆菌、克雷白氏杆菌、葡萄球菌引起的各种感染,“鸡尾酒疗法”起到了良好的效果,并对鸡尾酒疗法的安全性进行了评价。另一方面,在应用噬菌体制剂治疗细菌感染的同时,亦可考虑噬菌体制剂与抗生素联合用药达到治疗效果。

在噬菌体体内和体外的杀菌实验中,针对不同的宿主菌,同一噬菌体杀菌效率不同,这和噬菌体感染宿主菌的过程受到宿主菌基因表达水平的影响有关,噬菌体裂解宿主依赖于宿主菌的机制,从而增加了噬菌体裂解宿主菌的复杂程度。了解更多与噬菌体感染相关的宿主基因,这将有利于噬菌体的治疗效率,并且在未来提供多种临床感染的治疗方案。

通过检索,尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足之处,提供一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075及其突变株、突变蛋白和应用,该假定蛋白GP075发生突变,突变后的蛋白具有结构蛋白的功能,该类噬菌体突变株在原识别脂多糖的基础上,增加了额外的受体识别蛋白,可识别脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞或者只含有核心寡糖结构(core oligosaccharides)的宿主细胞,同时具有更宽的宿主范围、更强的裂解及吸附宿主细胞的能力,有望应用于噬菌体制剂,防治铜绿假单胞菌引起的各种感染。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:

一种铜绿假单胞菌噬菌体K8假定蛋白GP075,其核苷酸序列为SEQ No.1,其氨基酸序列为SEQ No.10。

一株铜绿假单胞菌噬菌体K8突变株K8-D7,所述突变株K8-D7能够感染脂多糖O-抗原缺陷型宿主细胞,其序列是在如上所述的假定蛋白GP075的氨基酸105、106之间插入1个与106至112完全重复的氨基酸序列;所述突变株K8-D7的核苷酸序列为SEQ No.2,其氨基酸序列为SEQ No.11。

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