[发明专利]采用一测多评法测定古羊藤中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛含量的方法

权利要求书

1.采用一测多评法测定古羊藤中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛含量的方法，其特征在于：采用HPLC法，以绿原酸为内参物，建立其与咖啡酸、4-甲氧基水杨醛的相对校正因子，利用相对校正因子计算古羊藤中咖啡酸、4-甲氧基水杨醛的含量。

2.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定古羊藤中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取古羊藤样品，加入80％甲醇溶液，超声提取，放冷，用80％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；

(2)对照品溶液的制备：称取绿原酸对照品、咖啡酸对照品、4-甲氧基水杨醛对照品，加适量甲醇溶解，得混合对照品溶液；

(3)相对校正因子的测定：取步骤(2)制备的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，得到混合对照品溶液中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛的峰面积，以绿原酸为内参物，按照相对校正因子计算公式计算出咖啡酸和4-甲氧基水杨醛的相对校正因子；所述计算公式为fsi＝fs/fi＝(As/Cs)/(Ai/Ci)；

式中As为内参物对照品s峰面积，Cs为内参物对照品s浓度，Ai为某待测成分对照品i峰面积；Ci为某待测成分对照品i浓度；

(4)样品中多指标成分的测定：精密吸取步骤(1)制备的供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到供试品溶液中各待测成分的峰面积，利用与绿原酸的相对校正因子计算古羊藤中绿原酸、咖啡酸、4-甲氧基水杨醛的含量。

3.根据权利要求2所述的采用一测多评法测定古羊藤中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛含量的方法，其特征在于，所述步骤(3)和(4)测定中，色谱条件为：色谱柱为C₁₈柱；以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸水溶液为流动相B组成的梯度洗脱液进行梯度洗脱；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为230nm；进样量为5μL；理论塔板数按绿原酸计算应不低于5000。

4.根据权利要求3所述的采用一测多评法测定古羊藤中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛含量的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：

5.根据权利要求2所述的采用一测多评法测定古羊藤中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛含量的方法，其特征在于，所述步骤(1)供试品溶液的制备为：取古羊藤样品约2g，精密称定，置于100ml锥形瓶中，精密加入80％甲醇25ml，称定重量，超声提取30min，放冷，用80％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

6.根据权利要求5所述的采用一测多评法测定古羊藤中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛含量的方法，其特征在于，所述超声提取的条件为：温度30℃，频率70kHz。

7.根据权利要求2所述的采用一测多评法测定古羊藤中绿原酸、咖啡酸和4-甲氧基水杨醛含量的方法，其特征在于，所述步骤(2)对照品溶液的制备为：取绿原酸对照品、咖啡酸对照品、4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含绿原酸89.27μg，咖啡酸26.90μg，4-甲氧基水杨醛18.47μg的混合对照品溶液。