[发明专利]黑果枸杞花青素在制备用于诱导两种癌细胞凋亡的药物中的应用

说明书

本发明公开了黑果枸杞花青素在制备用于诱导两种癌细胞凋亡的药物中的应用，包括以下步骤：1）MCF‑7、HepG2、Mac‑T和RAW264.7四种细胞的培养；2）四种细胞分别改用花青素培养基和正常培养基培养继续培养30个小时；3）步骤2）中的细胞分别进行细胞流式凋亡实验、EDU细胞增殖、GeminiSEM 300蔡司场发射扫描电镜和荧光定量PCR，证明黑果枸杞花青素促进两种癌细胞凋亡，并对另外两种正常细胞无影响。本发明首次披露了黑果枸杞花青素在调控肝癌细胞和乳腺癌细胞凋亡中的作用。相比于现有技术，不仅证明了黑果枸杞花青素能够诱导人乳腺癌细胞MCF‑7和肝癌细胞HepG2凋亡，并且对牛乳腺上皮细胞Mac‑T和小鼠巨噬细胞RAW264.7未见明显的毒性作用,因而可以有效地应用于抗癌制剂的研发中。

技术领域

本发明涉及黑果枸杞花青素在制备用于诱导两种癌细胞凋亡的药物中的应用，属于分子生物学领域。

背景技术

黑果枸杞花青素是从黑果枸杞果实中提取出的一种紫红色素，它色泽鲜艳自然，无特殊气味，是一种珍稀的天然食用花色苷类色素，属于生物类黄酮物质，是一类广泛存在于植物中的水溶性色素。花青素是一种存在于植物性食物中具有生物活性的化合物，具有较强的抗氧化和抗癌等特性。花青素的抗肿瘤机制主要是通过抗突变、抗氧化、抗炎、诱导转化、调节信号转导通路来抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞、促进肿瘤细胞凋亡、诱导自噬、抗肿瘤侵袭及转移、逆转肿瘤细胞耐药性和增加对化疗的敏感性等实现的。武雪玲等对黑果枸杞花青素的毒理学安全性进行了评价，结果表明小鼠和SD大鼠均未见明显的中毒症状及死亡，且未呈现致突变作用。目前关于黑果枸杞花青素诱导乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞HepG2凋亡作用尚未见报道。本发明就黑果枸杞花青素对人乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞HepG2生长情况及其诱导细胞凋亡的作用进行探讨。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明的目的是提供黑果枸杞花青素在制备用于诱导两种癌细胞凋亡的药物中的应用。本发明验证黑果枸杞花青素能够诱导乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞HepG2凋亡，同时对牛乳腺上皮细胞Mac-T和小鼠巨噬细胞RAW264.7未见明显的毒性作用，以便确定黑果枸杞花青素可应用于抗癌制剂的研发。通过细胞凋亡实验、EDU细胞增殖、GeminiSEM300蔡司场发射扫描电镜和荧光定量PCR等方法检测黑果枸杞花青素对两种癌细胞凋亡的调控作用。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案如下：花青素在制备用于诱导两种癌细胞凋亡的药物中的应用，其特征在于，所述的两种癌细胞为MCF-7(人乳腺癌细胞)、HepG2(人肝癌细胞)。

所述的花青素为黑果枸杞花青素。花青素的使用浓度为10-30ug/mL，处理时间为25-35h，优选为20ug/mL、处理时间30h。所述的花青素对Mac-T(牛乳腺上皮细胞)和RAW264.7(小鼠巨噬细胞)无毒。

本发明还提供黑果枸杞花青素在制备抑制或治疗乳腺癌或肝癌的药物中的应用。抑制癌症时，靶基因包括凋亡基因，其中一个靶基因为LATS2基因(即黑果枸杞花青素可以上调MCF-7、HepG2中LATS2基因的表达)。

本发明验证了黑果枸杞花青素能诱导两种癌细胞凋亡，包括以下步骤：

1)MCF-7、HepG2、Mac-T和RAW264.7四种细胞的分别培养(采用正常培养基)；

2)四种细胞分别培养至50％时，四种细胞分别采用20ug/mL花青素培养基或正常培养基继续培养30个小时；

3)对步骤2)得到的细胞分别进行流式细胞仪-细胞凋亡实验、EDU细胞增殖、GeminiSEM300蔡司场发射扫描电镜和荧光定量PCR，结果证明黑果枸杞花青素能够诱导人乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞HepG2凋亡，并且对牛乳腺上皮细胞Mac-T和小鼠巨噬细胞RAW264.7未见明显的毒性作用。