[发明专利]一种可视化纳米免疫制剂及其制备方法、应用

说明书

本发明涉及生物技术和医药技术领域，提供一种可视化纳米免疫制剂及其制备方法、应用。所述纳米免疫制剂为CANPs‑ICG‑anti‑PD‑L1纳米颗粒，以海藻酸钙纳米颗粒为载体，ICG为成像剂，anti‑PD‑L1为免疫检查点封锁剂，所述纳米免疫制剂形貌均一，分散性好，可对肿瘤进行高效的可视化免疫治疗。

技术领域

本发明涉及生物技术和医药技术领域，尤其是一种可视化纳米免疫制剂及其制备方法、应用。

背景技术

近年来，随着纳米医学技术的发展，纳米技术用于恶性肿瘤的治疗日渐成为人们研究的热点。随着多种肿瘤治疗方法的不断发展，人们发现单一的肿瘤治疗方法效果有限，所以以纳米材料为平台的联合治疗策略成为目前的研究热点之一。最近有研究表明，基于纳米材料的免疫疗法可以产生一系列的免疫反应，从而达到免疫治疗的效果。在众多的纳米材料中，天然高分子材料海藻酸钠具有可生物降解性、良好的生物相容性、良好的凝胶性和成膜性等,以海藻酸钠为原料制备的海藻酸钙基生物医用材料在医药和生物技术领域有着广阔的应用前景。吲哚菁绿(ICG)是一种有效的近红外染料，也是为数不多的被美国FDA批准应用临床的染料。注射入体内后，借助近红外(NIR)光可进行可视化显示。由于近红外光具有较强的穿透能力，在808纳米激光的照射下，甚至能显示组织层下10mm处的吲哚菁绿分布。且近年来，随着纳米技术的不断发展，通过纳米颗粒装载吲哚菁绿已取得一系列重要研究进展，是一项成熟的体内成像的方法。肿瘤微环境诱导肿瘤细胞高表达PD-L1，PD-L1通过与PD-1结合，负性调节T细胞功能，同时抑制细胞因子产生，从而促进肿瘤的免疫逃逸。通过阻断PD-1/PD-L1的结合，可恢复免疫细胞对肿瘤的有效免疫应答。anti-PD-L1免疫检查点封锁剂通过负性调节免疫信号通路，降低肿瘤微环境的免疫抑制，重新激活T细胞活性，将肿瘤细胞识别为“非自身”抗原，并将其与“自身”抗原区分开来，达到利用人体自身免疫系统杀伤肿瘤的目的。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种一种可视化纳米免疫制剂及其制备方法与应用。

本发明为解决背景技术中提出的技术问题，采用的技术方案是：一种可视化纳米免疫制剂，为CANPs-ICG-anti-PD-L1纳米颗粒，以海藻酸钙纳米颗粒为载体，吲哚菁绿(ICG)为近红外(NIR)光热治疗剂，anti-PD-L1为免疫检查点封锁剂。

优选的，上述纳米免疫制剂，粒径为70-160nm。

优选的，上述纳米免疫制剂，其中，ICG的载药率为75-85％，PD-L1连接率8％-12％。

本发明的第二个技术方案是上述可视化纳米免疫制剂的制备方法，具体方法步骤如下：

(1)制备海藻酸钙水凝胶纳米颗粒CANPs：配制18-36mM CaCl₂水溶液和0.03-0.06％(m/v)海藻酸钠水溶液，取27-29mL海藻酸钠水溶液，快速搅拌，同时逐滴加入1-3mLCaCl₂水溶液，快速搅拌一小时，10000转每分钟离心收集沉淀。

(2)制备CANPs-ICG纳米颗粒：取3-5mg吲哚菁绿，溶于5ml 10-20mg/ml的CANPs水溶液中，室温搅拌8-12小时，10000转每分钟离心收集沉淀，水洗2-3次。

(3)制备CANPs-ICG-anti-PD-L1纳米颗粒：活化上述CANPs-ICG纳米颗粒表面的羧基，将50-100微克anti-PD-L1加入到上述CANPs-ICG纳米颗粒溶液中，室温搅拌8-12小时，10000转每分钟离心收集沉淀，水洗2-3次。

本发明的第三个技术方案是纳米免疫制剂在制备肿瘤抑制药物方面的应用。

上述纳米免疫制剂制备的肿瘤抑制药物用于对原位肿瘤的成像和免疫治疗，有效抑制肿瘤。