[发明专利]沉默Ku70基因的siRNA、重组载体、细胞模型及在抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了一种沉默Ku70基因的siRNA、重组载体、细胞模型及在抗肿瘤药物中的应用。沉默Ku70基因的siRNA如SEQ ID NO.1所示。本发明的siRNA可以沉默Ku70在体内的表达，降低Ku70‑Polβ之间的相互作用，可降低肿瘤细胞DNA修复能力。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及沉默Ku70基因的siRNA、重组载体、细胞模型及在抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

碱基切除修复是细胞内修复ROS或暴露于某些环境因子攻击导致的碱基氧化损伤、无碱基位点以及SSBs等损伤类型的最重要的方式。BER也被公认为是纠正一些常见的DNA损伤形式的“主力”途径，这个过程主要包括以下步骤：(1)识别不正确的碱基部分(例如8-羟鸟嘌呤)然后将其切除，产生一个无碱基位点(Abasic apurinic site,AP site)；(2)在AP位点处将DNA其中的一条链切断；(3)在DNA链上的切口处聚合新的脱氧核苷酸；(4)连接末端切口。理论上修复过程中的每个步骤都可以独立进行，一些生物化学和结构生物学的研究结果表明，BER过程中的蛋白质在修复途径中以逐步协调一致的方式发挥作用，称为“Passing-the-Bathon”模型。

根据修复过程中延伸片段的长度，DNA碱基切除修复可以分为短片段碱基切除修复(Short Patch Base Excision Repair，SP-BER)和长片段碱基切除修复(Long PatchBase Excision Repair，SP-BER)在SP-BER中，只有单个脱氧核苷酸掺入到DNA链中取代受损伤的碱基，而对于LP-BER，掺入到DNA链中的脱氧核苷酸有2-10个。第一步通常起始于识别和切除DNA中受损伤的碱基，包括尿嘧啶、3-甲基腺嘌呤、8-OH-dG、甲酰嘧啶等。在这个初始阶段，机体中具有多种糖苷水解酶发挥功能，这类酶中包括十多种不同的糖苷酶。这些糖苷水解酶特异性的识别特定的被修饰的碱基，通过催化碱基与戊糖之间的N-糖苷键来切除被错误修饰或受损的碱基，形成含有无碱基位点的中间产物DNA，用于下游一系列修复酶的加工。这些糖苷酶包括一些单功能糖苷水解酶，他们只有N-糖苷键水解功能，例如UDG(Uracil-DNA glycosylase)，它们在催化完成后依旧结合在产物DNA上保护AP位点不被自发切断或促进后续碱基切除修复反应进行。除此之外机体内也含有一些多功能糖苷水解酶，例如OGG1(8-oxoguanine glycosylase)，NEIL1(endonuclease VIII-like protein)，它们不仅能够识别并切除受损伤的碱基，还能继续在AP位点的3’端以β-或β,δ-消除反应切断DNA骨架，产生含有3’-α,β-不饱和醛或3’-磷酸的单链断裂，在下游反应中转化为正常的3’-OH。

经过糖苷酶加工后，在损伤位点处形成AP位点，然后APE1(ApurinicEndonuclease 1)蛋白执行BER的下一个步骤：APE1负责在AP位点处的5’端切割生成3’-OH和5’端脱氧磷酸核糖(5’-deoxyribose phosphate,5’-dRP)作为后续修复反应的底物。当APE1完成它在BER过程中的功能脱离DNA后，Polβ以一种“接力”的方式结合到DNA上，Polβ的AP裂解酶活性负责切除5’-dRP结构并接下来在3’-OH处聚合一个新的脱氧核苷酸到DNA链中。最后的连接过程由DNA连接酶Ⅲα(DNA LigaseⅢα,LigⅢα)和XRCC1(X-Ray RepairCross Complementing Gene 1)共同完成，这种修复途径通常被称为SP-BER。当Polβ聚合到DNA链上的脱氧核苷酸的数目为2-10个时，新加入的脱氧核苷酸就会把下游的DNA链顶起形成一个Flap结构，这个结构会被核酸酶FEN1(Flap Structure Specific Endonuclease 1)特异性识别并切除，最后由DNA连接酶(Ⅰ LigaseⅠ,Lig Ⅰ)连接切口完成LP-BER。