[发明专利]牛β-酪蛋白总含量的定量检测试剂盒及其应用

说明书

本公开涉及牛β‑酪蛋白总含量的定量检测试剂盒及其应用。具体地涉及选用牛β‑酪蛋白天然变异体的共有特征肽段A和B作为标准品，并将其中一种或两种同位素化作为内标，采用同位素稀释‑生物质谱定量试剂盒技术，开发定量检测试剂盒产品，实现非发酵类乳制品中牛β‑酪蛋白总含量的定量检测。经测试，本定量试剂盒在非发酵类乳制品中针对牛β‑酪蛋白总含量的定量限为17.8mg/100g，QC样品重现性RSD＜7.83％(n＝18)，有效体现产品稳定性与准确性，可为非发酵类乳制品中包含天然变异体的牛β‑酪蛋白总含量提供方便、快速、可靠的定量检测服务。

发明领域：

本公开属于生物检验技术领域，具体涉及用于测定样品中牛β-酪蛋白总含量的定量检测试剂盒及其应用。

背景技术：

随着奶牛工业化饲养的不断推进，人工授精等人为因素影响了奶牛的天然繁衍进程。牛β-酪蛋白包含多种天然变异体，包括A1、A2、A3、B、C、D、E、F、G、H等，其中，牛β-酪蛋白A2变异体是奶牛β-酪蛋白最原始的天然变异体，其氨基酸序列如图1所示。与A2天然变异体不同，A1变异体存在第82、132、152、153、190位氨基酸的变异，A3变异体存在第121位氨基酸的变异，B变异体存在第82、137位氨基酸的变异，C变异体存在第52、82位氨基酸的变异，D变异体存在第33位氨基酸的变异，E变异体存在第51氨基酸的变异，F变异体存在第82、167位氨基酸的变异，G变异体存在第82、132、153、190位氨基酸的变异，以及H变异体存在第40、103、152、153位氨基酸的变异。

目前，已有高效液相色谱方法、毛细管电泳方法或液相色谱串联质谱方法，但这些方法在定量检测牛源总β-酪蛋白时，不能有效排除牛β-酪蛋白多种变异体对定量结果的干扰。高效液相色谱方法和毛细管电泳方法对不同变异体形成的色谱峰不能一一区分且不能基线分离，影响定量结果的准确性。而已有的液相色谱串联质谱方法所采用的定量肽段包含部分变异体的变异位点，亦影响定量结果的准确性。

发明内容：

本公开选择不包含已知的牛β-酪蛋白变异体的变异位点的稳定特征肽段作为定量特征肽段，并结合同位素稀释-生物质谱定量检测技术，建立牛β-酪蛋白总含量的定量检测方法与试剂盒产品，可有效保证定量结果的准确性与可靠性。本公开旨在提供一种牛β-酪蛋白总含量的定量检测试剂盒。

本公开采用的技术方案：

在一个方面，本公开提供牛β-酪蛋白总含量的定量检测试剂盒，包括牛β-酪蛋白特征肽A标准品、牛β-酪蛋白特征肽B标准品和牛β-酪蛋白特征肽内标，其特征在于牛β-酪蛋白特征肽A的氨基酸序列为：GPFPIIV，即甘氨酰-脯氨酰-苯丙氨酰-脯氨酰-异亮氨酰-异亮氨酰-缬氨酸，牛β-酪蛋白特征肽B的氨基酸序列为：AVPYPQR，即丙氨酰-缬氨酰-脯氨酰-酪氨酰-脯氨酰-谷氨酰胺酰-精氨酸，所述牛β-酪蛋白特征肽内标为牛β-酪蛋白特征肽A和/或牛β-酪蛋白特征肽B。

在一个实施方案中，所述牛β-酪蛋白特征肽内标被同位素标记。

在一个实施方案中，所述牛β-酪蛋白特征肽内标的氨基酸序列为：GPFPI*I*V，其中I*为C¹³、N¹⁵同位素全标记的异亮氨酸，其中所述牛β-酪蛋白包含牛β-酪蛋白天然变异体。

本公开使用的术语“牛β-酪蛋白天然变异体”包括但不限于牛β-酪蛋白的A1、A2、A3、B、C、D、E、F、G、H等天然变异体。