[发明专利]一种处理重度污染的脐带组织的方法

权利要求书

1.一种处理重度污染的脐带组织的方法,其特征在于：包括以下步骤：

A、去除脐带表面肉眼可见的污染源：将脐带放入培养皿中，用生理盐水冲洗，除去脐带表面较大的血块和粘液，每清洗一次换一个培养皿，至清洗后的溶液透明无色为止；

B、去除脐带内三根血管内的血液：用注射器吸取生理盐水，从血管一端插入，用止血钳夹紧，迅速推入生理盐水，冲洗血管内壁，每次冲洗量为50ml-60ml，每根血管冲洗5次-6次，若还有红色液体流出，则增加次数，至流出液体透明无色；

C、去除血管内的凝血：用注射器吸取肝素钠溶液，从血管一端插入，用止血钳夹紧，缓慢推入，每次冲洗量为20ml-30ml，每根血管冲洗5次-6次，直至流出的液体透明无色；

D、血管内部消毒：用注射器吸取5ml-6ml 75％酒精迅速冲洗血管内部，冲洗完毕后立即用20ml-30ml生理盐水冲洗血管，三根血管依次消毒；

E、脐带整体消毒：将脐带浸没在75％酒精中1分钟-2分钟，至脐带表面褶皱，用生理盐水冲洗三遍，剪去脐带两端各2厘米；

F、分离华通氏胶：将脐带展开，用手术刀直接割取脐带中心处的华通氏胶，操作过程中避免与血管有任何接触；

G、华通氏胶表层消化：将所获得的整块华通氏胶，按体积比1:1，加入浓度为0.1％的Ⅱ型胶原酶，37℃，150rpm恒温摇床震荡消化5分钟-6分钟；

H、华通氏胶表层清洗：

I、剪碎华通氏胶并清洗：将清洗后的组织放入离心管中剪成2mm×2mm大小的组织，加入生理盐水震荡清洗，用100目筛网过滤，重复两次；

J、华通氏胶的筛选；

K、脐带间充质干细胞培养扩增及冻存：根据组织贴壁法培养细胞，根据各机构要求扩增冻存脐带间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的一种处理重度污染的脐带组织的方法，其特征在于：所述步骤H具体过程如下：将消化后的组织用生理盐水冲洗，至洗液不产生拉丝状，然后将组织放入培养皿中，用组织镊夹住一端，用手术刀将组织表层刮去，然后再用生理盐水清洗3-5遍。

3.根据权利要求1所述的一种处理重度污染的脐带组织的方法，其特征在于：所述步骤J具体过程如下：一次筛选操作为选取大小厚度均一的组织块接入96孔板中，每个孔内接一个组织块，加入适量培养基没过组织即可，48小时后显微镜下观察，将污染的接种孔标记，将未污染的组织吸出，放入新的孔板中，如果污染的孔数大于4个，则需要重复接种96孔板，直至污染孔数小于等于4个；二次筛选操作为当96孔板中污染孔小于等于四个后，吸取无污染组织块，用六孔板接种，每个六孔板中放入4个组织块，组织块的量可根据污染孔的比例调整，如果污染孔数多，则每个六孔板中放入的组织块数量可减少为3个，降低交叉污染的概率，每个六孔板中加入适量培养基，没过组织块即可，72小时之后选取未污染的接种孔，将组织转移至T25瓶中贴壁培养，每个瓶中接种10至12个组织块，每24小时观察，如有污染直接舍弃此培养瓶。